Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ Este trabajo se realizó en el Laboratorio de Metabolismo Fosfocálcico y Vitamina D “Dr. Fernando Cañas” de la Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular de la Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Córdoba Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ Dedicada A mi mamá A mi esposo A mi hija Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ Escribir los agradecimientos de esta Tesis Doctoral significa haber concluido un inmenso trabajo realizado en colaboración con varias personas que me han apoyado durante los años que he dedicado a la realización de este proyecto. Quiero expresar, en primer lugar, mi más sincero agradecimiento a la Prof. Dra. Nori Tolosa de Talamoni por la confianza depositada en mí al aceptarme en su grupo de investigación para realizar esta Tesis. Además, por su dedicación, por su continua labor de orientación en la dirección de la misma, conocimientos y motivación. A los Señores Profesores de la Comisión Asesora de Seguimiento: Dr. Rubén Hugo Ponce y Dr. Carlos Rafael López, por sus constantes estímulos para seguir adelante con los resultados de esta Tesis. Mi gratitud también a mis compañeras de laboratorio: Gabi, Adri, Vivi, Ana María, Elena, María Angélica, Ceci, Lu, Agata, y un agradecimiento especial a Gaby Díaz, con quien compartí muchas horas contando células y armando los paneles de fotos. A todos mis compañeros de Cátedra, por su afecto. Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ A todas las personas que me ayudaron en la captura de los ratones Graomys griseoflavus: integrantes del laboratorio “Dr. Cañas”, Dr. Gerardo Theiler, Dr. Rubén Hugo Ponce, y los ratones Graomys centralis: Dr. Ricardo Ojeda. A las Dras. Silvia Garagna y Valeria Merico, por sus asesoramientos en espermatogénesis y por sus colaboraciones en el trabajo. A la Dra. Liliana Muñoz por las determinaciones de testosterona. A mi papá, por ser mi ángel guardián. A mi mamá, por brindarme día a día con ternura todo su apoyo. Finalmente, debo un agradecimiento especial a mi esposo Guillermo, por su amor, comprensión y aliento constante. Y a mi hija Azul, quien siempre me esperó después del trabajo con los brazos abiertos, ella me da la fuerza para concretar todos mis sueños. Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ Con los resultados de esta Tesis se realizaron las siguientes publicaciones: “A mitochondrial mechanism is involved in apoptosis of Robertsonian mouse germ cells”. V. Merico, G. Díaz de Barboza, C. Vasco, R. Ponce, V. Rodríguez, S. Garagna, N. Tolosa de Talamoni. 2008. Reproduction. 135: 797-804. Cambridge, Inglaterra. “Spermatocyte apoptosis, wich involves both intrinsec and extrinsec pathways, explains the sterility of Graomys griseoflavus x Graomys centralis male hybrids”. V. Rodríguez, G. Díaz de Barboza, R. Ponce, V. Merico, N. Tolosa de Talamoni. 2010. Reproduction, Fertility and Development. 22: 478-488. Collingwood, Australia. Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ El trabajo de esta Tesis se realizó con los aportes recibidos de FONCYT (PICT 2005-32464), CONICET (PIP 2005-2006), SECyT (UNC 2006-2007) (Dra. Nori Tolosa de Talamoni). Convenio Bilateral (2005-2007) entre SECyT (Dra. Nori Tolosa de Talamoni) y Ministero degli Affari Steri (Italia) (Dra. Silvia Garagna). Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ “LA FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS NO SE HACE SOLIDARIA CON LAS OPINIONES DE ESTA TESIS” Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ ÍNDICE DE CONTENIDO RESUMEN……………….…………………………………….……….1 SUMMARY………………………………………..…….…….………..4 ABREVIATURAS…….……………………….……….…….………...7 INTRODUCCIÓN………………….……………………….…………..8 MATERIAL Y MÉTODOS……………….………….…………….….26 Animales de experimentación................................................27 Análisis morfológico.............................................................28 Histología……….…………………………………………....28 Microscopía óptica…………………………………………....29 Microscopía electrónica……………………………………….29 Ensayo hormonal……………………………………………..29 Análisis inmunohistoquímico….……………………………....30 Análisis de la fragmentación del ADN………………………....31 Análisis de Western blots…………………..………………....32 Análisis estadístico…………....…………………………….....35 RESULTADOS……………..…………..……………………………..36 Ratones Mus musculus domesticus……………....…………...37 Ratones Graomys………….…………………..……..………45 DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES…………………….…….…...….66 BIBLIOGRAFÍA………….…………………………………..…..……80 Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ ÍNDICE DE TABLAS Tabla 1. Frecuencia de túbulos seminíferos TUNEL positivos por sección testicular y porcentaje de células germinales TUNEL positivas por túbulo seminífero en los ratones CD1, Milano II e híbridos subfértiles………..……38 Tabla 2. Frecuencia de espermatocitos en metafase positivos por sección testicular para los marcadores apoptóticos estudiados en ratones híbridos subfértiles……………………………………………………………...…41 Tabla 3. Colocalización de calbindina con los distintos marcadores apoptóticos en testículos de ratones híbridos subfértiles………………..…44 Tabla 4. Relación peso testicular/peso corporal y testosterona sérica de los diferentes citotipos de Graomys…………………………..…………...….46 Tabla 5. Frecuencia de túbulos seminíferos positivos por sección testicular para los marcadores apoptóticos en diferentes citotipos de Graomys……………………………………………………….........……54 Tabla 6. Frecuencia de espermatocitos en paquitene positivos para los marcadores apoptóticos en diferentes citotipos de Graomys…….……....…57 Tabla 7. Frecuencia de túbulos y espermatocitos en paquitene calbindina positivos en híbridos Graomys a diferentes edades………..………..……..64 Tabla 8. Colocalización de calbindina con los marcadores apoptóticos estudiados en los híbridos Graomys a diferentes edades……..……..…….64 Tesis Doctoral de: VALERIA ANDREA RODRÍGUEZ