Rôle de la protéine Alix dans le système nerveux central PDF
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THÈSE Pour obtenir le grade de DOCTEUR DE L’UNIVERSITÉ GRENOBLE ALPES Spécialité : Neurosciences, Neurobiologie Arrêté ministériel : 7 août 2006 Présentée par Marine LAPORTE Thèse dirigée par Sandrine FRABOULET Préparée au sein de l’équipe Neurodégénérescence et Plasticité dirigée par le Pr. Rémy SADOUL au Grenoble Institut des Neurosciences - Inserm U836 dans l'École Doctorale de Chimie et Science du Vivant Rôle de la protéine Alix dans le système nerveux central : de la neurogenèse à la plasticité synaptique Thèse soutenue publiquement le 13 novembre 2015, devant le jury composé de : M. Frédéric SAUDOU PUPH, Universités de Grenoble, Président M. Maximilian FURTHAUER CR1, Université Nice Sophia Antipolis, Rapporteur M. David PERRAIS DR2, Université de Bordeaux 2, Rapporteur Mme Lydia DANGLOT CR1, Université Paris Diderot, Examinateur M. Pierre GRESSENS DR1, Université Paris Diderot, Examinateur M. Rémy SADOUL PU, Universités de Grenoble, Examinateur Mme Sandrine FRABOULET MCU, Universités de Grenoble, Directeur de Thèse Remerciements Mes premiers remerciements vont aux membres de mon jury Maximilian Fürthauer, David Perrais, Lydia Danglot, Pierre Gressens et Frédéric Saudou qui ont accepté de faire partie de mon jury de thèse. Merci pour votre temps et le regard critique que vous avez porté sur mes travaux. Sandrine et Rémy… Il va être difficile de résumer ce que je vous dois en quelques lignes. Merci de m’avoir permis de travailler à vos côtés en me confiant l’étude de vos Alix chéries que je suis bien triste de quitter. Merci pour votre confiance, vous avez su me laisser avancer à mon rythme et un peu, comme je l’entendais parfois, tout en étant toujours là quand j’en avais besoin. Votre complémentarité m’a offert le parfait équilibre pour arpenter les hauts sommets de la thèse. Sandrine je te remercie pour ton tempérament calme et avisé qui m’a souvent apaisée et canalisée. L’enthousiasme et le courage avec lequel tu te lançais dans chaque nouvelle technique et te plongeais dans la théorie de chaque « nouveau » phénotype de la souris m’ont servi d’exemple à suivre. Rémy, je te remercie pour ta sincérité permanente et ta disponibilité. La simplicité avec laquelle nous pouvions aborder absolument tous les sujets m’a toujours agréablement étonnée. J’ai énormément profité de toutes ces discussions et je te remercie de m’avoir fait profiter de tant de connaissances et de m’avoir transmis le gout de la recherche. Merci à tous les deux, vous avez été bien plus que de simples directeurs de thèse. J’adresse également de sincères remerciements à tous les membres de la « famille équipe 2 ». Vous êtes, pour moi, l’exemple que générosité et convivialité riment avec rigueur et qualité scientifique. Je vous remercie des conditions de travail dont j’ai pu bénéficier, aussi bien sur le plan humain que professionnel. Chantal, merci de m’avoir fait découvrir le monde de la recherche sous un regard aussi passionné. Je suis arrivée dans l’équipe en 2009 avec la ferme intention de partir en Master pro mais tu étais convaincue je devais faire une thèse… Alors voilà, je t’ai écouté Chantal et je te remercie m’avoir donné la confiance dont je manquais. Grâce à toi, j’ai découvert un monde que j’espère ne pas quitter de si tôt. Anne… Comment résumer mes remerciements en une phrase… « Ola Qué tal ? Qué tal y tu ? Qué tal qué tal… » Merci pour nos fous rires, nos discussions de filles toujours discrètes, les arlequins, merci de m’avoir toujours donné l’impression que j’étais super balaise sur Excel, merci pour ta positive attitude et tes paroles souvent réconfortantes. Merci aux deux post‐doc du labo, Karine, pour tes paroles rassurantes et tous tes conseils de post‐doc expérimentée (j’ai pas dit vieille !!) sur la vie après la thèse, la joie de voler de ses propres ailes, de découvrir un autre labo, enfin de ne plus être un thésard quoi. Merci à José pour ton aide ! Pardon d’avoir si souvent détruit la langue espagnole avec Anne… Merci à Fiona de qui j’ai beaucoup écorché les oreilles au cours de ces 5 années. Merci pour la patience avec laquelle tu m’as reprise, corrigée et ainsi fait progresser en anglais. Merci pour ta gentillesse et ton humour qui m’ont beaucoup fait de bien... Le souvenir du dossier nommé « sperme Marine » reste un de mes plus beaux fous rires. Merci également de m’avoir appris absolument tout de l’histologie (tout, mais surtout que la paraffine c’est mieux !). Merci Yves pour tes conseils et tes explications poussées en statistique où chacune de mes questions menait à la démonstration mathématique de chaque test. Merci à Fred pour ton aide quotidienne et la patience avec laquelle tu m’as appris à dompter les souris Alix ko. Merci également à Karine, notre gestionnaire adorée, pour ton sourire, ta bonne humeur et ton culot qui m’ont souvent sortis de situations impossibles, et à Anne d’avoir prit le relai avec beaucoup d’efficacité et de dynamisme. Un grand, que dis‐je, un immense merci à Béa et Christine… Aucun étudiant ne saurait s’en sortir sans l’une de vous dans les parages. Merci pour votre disponibilité illimitée et la gentillesse avec laquelle vous m’avez toujours apporté votre aide. Christine, merci des moments passés ensembles à décortiquer le phénotype des souris, ou encore de m’avoir appris que l’eau du robinet ne s’autoclave pas !! Mais aussi pour tous les à‐côtés qui n’ont finalement pas grand chose à voir avec la science. Merci Béa pour toutes nos discussions, plus souvent philosophiques que scientifiques. J’applique régulièrement ta théorie de la fainéantise intelligente, même si des fois ça n’a rien d’intelligent… Tu m’as beaucoup appris pendant cette thèse au cours de laquelle je ne me suis pas construite que scientifiquement. Merci également aux petits jeunots qui, de leur passage éclaire ont su mettre un peu de soleil et de joie dans mon quotidien : Galil, Matthieu, Jessica, et mes 3 petits poussins Rachel, Céline et Laurie. Merci pour votre bonne humeur et vos questions pertinentes. Merci à Victoria et Florent, avec qui je n’ai pas forcement partagé que des sourires au café. Merci pour votre implication dans le projet Alix qui demandait l’acharnement et la rigueur dont vous avez fait preuve. Ca a été un plaisir de travailler avec vous. Un dernier merci à Joseph. Few words in english to tell you how great it was to have you around for my last months in the lab. It has been a pleasure to work with you, to teach you French (and science) and to learn from you. I wish you all the best you deserve for your phD and afterward. Enfin je ne pourrais remercier l’équipe 2 sans une mention spéciale aux doctorants Sadouliens. Mathilde et Romain vous nous avez tenu la main puis passé le relais avec beaucoup de sympathie. Mathilde, merci de m’avoir montré qu’il ne faut jamais baisser les bras ! Romain, merci pour les moments qu’on a partagé à parler ESCRT ou du dernier modèle de chez Volkl. Bonne chance à vous deux ! Charlotte, merci d’être mon acolyte des plans machiavéliques de manipulation de haut niveau ! Merci pour ta bonne humeur et particulièrement pour tes délicates attentions ces dernières semaines. Entre la relecture et les petits plats, tu m’as bien materné… Faut dire que tu sais faire maintenant, j’en connais une qui a de la chance de t’avoir pout toute la vie ! Pour finir, Vincent… Nos discussions dans la pièce de culture vont me manquer… Heureusement que y’avait un sas parfois… ! Tu as toujours su quand me remonter le moral et quand me laisser faire mon boudin, comme un véritable ami. Et voilà, j’ai fait une tartine… Mais je ne pouvais pas faire plus court. Bonne continuation à vous tous que je n’oublierai jamais… Nul besoin de tatouage sur la fesse gauche pour garder en mémoire les années passées à vos cotés, le souvenir de ce laboratoire est gravé dans un endroit que les aléas de la vie ne sauraient déformer. Je remercie également les animaliers pour leur travail qui a largement contribué à mes travaux de thèse. Merci Fabien, Laure, Romain, Sylvain, Pauline et Manon et pardon pour toutes les fois où j’ai fichu le bordel à l’animalerie… Merci aux membres des autres équipes du GIN qui ont ponctué mon quotidien de bons conseils et de moments sympathique sur la terrasse, autour d’une bière ou au restau U. Merci à Jacques, Toff, Eric, Annie, Marie‐Jo, Christophe, Nora, Fabien, Mireille, Sylvie, Alain, Isabelle et Julie pour les discussions scientifiques, les encouragements, les blagues du vendredi, les gâteaux d’anniversaire, les échanges de bouquin et les conseils de diététique. Merci à Yasmina pour nos superbes collaborations et les bons moments qui vont avec. Je n’oublierai jamais la semaine à Bordeaux avec Florence où votre notoriété à Imaging the Cell me faisait assister à tous les moments les plus sympas ! Un petit merci pour les Bordelais, Ngoc, Morgane et David pour leur accueil et leur gentillesse pendant mon séjour. Un remerciement spécial à Karin S., découvreuse du phénotype qui fait la véritable notoriété des souris Alix ko… Mais surtout, pour ta gentillesse et ta générosité qui m’ont toujours beaucoup touchée. Merci pour ton accueil chaleureux à l’occasion des nombreuses soirées que l’on a faites chez vous. Merci à tous les enseignant chercheurs pour leur confiance lors de mes quatre années d’enseignement : Stefan, Emmanuelle, Bertrand, Claire, Virginie, Frank et bien sur Fiona, Sandrine et Rémy. Merci également aux copains du GIN, Hélène, Mathieu, Mélina, Alexia, Margaux, Ben, Chrystelle, Julie, Max, Sandrine, Lucie, Muriel, Julie‐Anne, Anne‐Cécile, Fabienne, Soumya, Aurélie… pour tous les joyeux moments, plus nocturne que diurne, qu’on a vécu ensemble dans les bars, sur des skis, dans les bars, à faire les dindes, dans les bars et dans la niche du chien d’Annie… Mention spéciale à Martalinette et Eléa (alias Kelya) dont le rire cristallin traversait tout le deuxième étage pour venir égayer mes journées. Ne changez rien les filles, vous nous faites beaucoup de bien. Merci tout particulier à Marc, Lauriane, Marie‐Lise et Anouk qui, plus que des co‐thesard, sont devenus de vrais amis. Anouk, Marie‐Lise, merci de m’avoir entrainé dans de folles aventures mais aussi de me montrer à quoi ressemble l’ascension vers la sagesse. Marc et Lauriane, merci pour vos délicates attentions et votre inconditionnelle gentillesse. Merci à Fannynette, ma coloc d’amour pour les bons petits plats et les soirées tranquilles où on refaisait le monde sur le canapé en regardant tellement vrai… A nous écouter, on aurait pu diriger nos équipes, le GIN, la France, l‘univers… Merci pour tout ça. Alexis, mon chouchou, merci pour tout, je n’ai la place et trop de pudeur pour tout écrire mais tu sais tout ce que tu représentes pour moi. Merci pour nos discussion scientifiques (mais pas que) au Saint‐Pierre, d’avoir toujours été là dans les bons et les mauvais moments du M1 jusqu'à mes dernières heures de rédaction !! Qu’on soit bien d’accord, tu es carrément exceptionnel !! A mes supers copains qui me ramènent à la vrai vie : Marine, Laura, Guigui, Clairounette, Mimi, Piloo, Anne‐Cha, Victoria, Elsa, Zai, Ségolène, Nico, Robinou, Laurette, Chachaaaa, Sarah, Chris, Chachou, John et Arthur, le petit nouveau. Je vous remercie de vos encouragements (surtout ceux venant d’Australie) et d’être restés là malgré mon absence totale de nouvelle, en tout particulier pendant la rédaction ! Merci aussi à toute ma famille, de me supporter depuis toujours. Merci à mes parents d’avoir toujours été la en cas de besoin sans jamais me laisser m’apitoyer sur mon sort. Merci Yves‐Michel pour tes précieux conseil de vie et maman, heureusement que tu étais la pour me coucouner mais aussi me rappeler de… payer mes impôts, de me nourrir, de donner des nouvelles… Merci d’être toujours la quand j’ai besoin de toi. Je remercie également Morgane, Thomas, Nathan et Maël, qui me rappellent jour après jour que plus belle ambition dans la vie, c’est d’être heureux. Et pour finir, merci à Alex simplement pour ce que tu es. Je ne serai jamais venu à bout de cette thèse sans toi à mes cotés. Maintenant, prépare toi à me voir débouler dans ta petite vie de Genevois, pour écrire un nouveau chapitre de notre vie. Liste des abréviations principales 4AP : 4‐aminopyridine Alg‐2 : apoptosis‐linked gene 2 Alix : Alg‐2 interacting protein X AMPA : α‐amino‐3‐hydroxy‐5‐methylisoazol‐4‐propionate ANR : anterior neural ridge AP2 : adaptor protein 2 BDNF : brain‐derived neurotrophic factor BE : bulk endocytose bRG : basal Radial glia progenitor (progéniteurs basaux de la glie radiaire) CIE : clathrin‐independent endocytosis CHMP : charged multivesicular protein CME : clathrine‐mediated endocytosis CR : Cajal‐Retzius CTxB : Cholera Toxin Chain B EGC : éminence ganglionnaire caudale EGF : epithelium growth factor EGFR : epithelium growth factor receptor EGL : éminence ganglionnaire latérale EGM : éminence ganglionnaire médiane EIAV : equine infectious anemia virus Ena/VASP : enable/vasodilatator‐stimulated phosphoprotein ESCRT : endosomal sorting complexe required for transport F‐actine : actine filamenteuse FAK : focal adhesion kinase FGF : fibroblast growth factor FGFR : fibroblast growth factor receptor G‐actine : actine Globulaire GM1 : Galβ3GalNAcβ4(Neu5Acα3)Galβ4GlcCer ILV : intraluminal vesicle IP : progéniteurs intermédiaires Ko : knockout LBPA : Lysobisphosphatidic acid LTP : long term potentiation MAP : microtubule associated protein MEF : mouse embryonic fibroblast MVE : multivesicular endosome NEC : neuroepithelial cells (cellules neuroépithéliales) NGF : neural growth factor NLG : Neuroligine NMDA : N‐méthyl‐D‐aspartate NT : neurotransmetteur PC : plaque corticale PIP : Phosphatidylinositol(4,5)Phosphate 2 PoA : pre‐optic area (Aire pré‐optique) PP : pré‐plaque PPSE : potentiel post‐synaptique excitateur PRD : prolin rich domain PSD : post‐synaptic density (densité post‐synaptique) RGC : radial glial cells (cellules de la glie radiaire) SHF : stimulation haute fréquence SNARE : (Soluble N‐ethylmaleimide‐sensitive factor Attachment protein REceptor) SNC : système nerveux central SNP : système nerveux périphérique SP : sous plaque Tsg‐101 : tumor susceptibility gene 101 UFE : ultra‐fast‐endocytosis VAMP : vesicle‐associated membrane protein VIH : Virus de l’immunodéficience humaine VPS : vesicular sorting protein VS : vesicule synaptique Wnt : Wingless Integration site ZM : Zone marginale ZSV : Zone sub‐ventriculaire ZV : Zone ventriculaire Wt : wild type !"##$%&'( !"#$%&'()*++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++*,* ! -./01234/-1.*+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++*5* ! -+*6)*7879:%)*;)"<)'=*>);9"$(*?*1"@A@;)*)9*B#<)(CDD)%);9*+++++++++++++++++++++++++++*E! 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