UNIVERZA V LJUBLJANI BIOTEHNIŠKA FAKULTETA Darinka KORON POMEN ALTERNATIVNIH METOD RAZKUŽEVANJA TAL ZA RAZVOJ ARBUSKULARNE MIKORIZE JAGODE (Fragaria x ananassa Duch.) DOKTORSKA DISERTACIJA Ljubljana, 2014 UNIVERZA V LJUBLJANI BIOTEHNIŠKA FAKULTETA Darinka KORON POMEN ALTERNATIVNIH METOD RAZKUŽEVANJA TAL ZA RAZVOJ ARBUSKULARNE MIKORIZE JAGODE (Fragaria x ananassa Duch.) DOKTORSKA DISERTACIJA IMPORTANCE OF ALTERNATIVE SOIL DISINFECTION FOR ARBUSCULAR MYCORRHIZA OF STRAWBERRY (Fragaria x ananassa Duch.) DOCTORAL DISSERTATION Ljubljana, 2014 Koron D. Pomen alternativnih metod razkuževanja tal…mikorize jagode (F. x ananassa Duch.). Dokt. disertacija. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, 2014 Doktorska naloga je zaključek podiplomskega študija na Biotehniški fakulteti Univerze v Ljubljani. Naloga je bila opravljena na Kmetijskem inštitutu Slovenije, kjer je v sklopu Poskusnega sadovnjaka na Brdu pri Lukovici potekal poljski poskus in v rastlinjakih inštituta, kjer so potekali lončni poskusi. Molekulska identifikacija gliv je potekala na Katedri za rastlinsko fiziologijo Oddelka za biologijo Biotehniške fakultete Univerze v Ljubljani. Študijska komisija Oddelka za biologijo je za mentorico doktorske naloge imenovala prof. dr. Marjano Regvar. Komisija za oceno in zagovor: Predsednik: prof. dr. Franc ŠTAMPAR Univerza v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Oddelek za agronomijo Članica: prof. dr. Marjana REGVAR Univerza v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Oddelek za biologijo Član: prof. dr. Franci Aco CELAR Univerza v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, Oddelek za agronomijo Član: prof. dr. Slavko TOJNKO Univerza v Mariboru, Fakulteta za kmetijstvo in biosistemske vede Datum zagovora: 10. 1. 2014 Doktorsko delo je rezultat lastnega raziskovalnega dela. Podpisana se strinjam z objavo svoje naloge v polnem tekstu na spletni strani Digitalne knjižnice Biotehniške fakutete. Izjavljam, da je naloga, ki sem jo oddala v elektronski obliki, identična tiskani verziji. Darinka Koron II Koron D. Pomen alternativnih metod razkuževanja tal…mikorize jagode (F. x ananassa Duch.). Dokt. disertacija. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, 2014 KLJUČNA DOKUMENTACIJSKA INFORMACIJA ŠD Dd DK UDK 581.1:634.753(043.3)=163.6 KG jagoda/razkuževanje tal/biofumigacija/solarizacija/arbuskularna mikoriza/temni septirani endofiti/mikorizna kolonizacija/TTGE/rast/pridelek/pleveli AV mag. KORON, Darinka, univ. dipl. ing. agr. SA REGVAR, Marjana (mentor) KZ SI-1000 Ljubljana, Jamnikarjeva 101 ZA Univerza v Ljubljani, Biotehniška fakulteta LI 2014 IN Pomen alternativnih metod razkuževanja tal za razvoj arbuskularne mikorize jagode (Fragaria x ananassa Duch.) TD Doktorska disertacija OP XII, 113 str., 21 pregl., 23 sl., 22 pril., 236 vir. IJ sl JI sl/en AI Vpliv biofumigacije in solarizacije na rast in rodnost jagod (Fragaria x ananassa Duch.) ter razvoj arbuskularne mikorize, smo v lončnih in poljskem poskusu primerjali s kemičnim razkuževanjem z dazometom in kontrolo. V lončnih poskusih smo polovici rastlin dodali naravni mikorizni inokulum. Biofumigacijo smo izvedli z rastlinami Brassica juncea (Bj), Sinapis alba (Sa) in Eruca sativa (Es). Solarizacijo smo izvedli s toplotno obdelavo zemlje na 37 °C (200 ur). V poljskem poskusu smo biofumigacijo izvedli z rastlinami (Bj, Sa in Es) ter nebiocidno rastlino Vicia faba var. minor (Vf). Tla smo solarizirali s prekrivanjem s črno in prozorno folijo (6 in 9 tednov). Biofumigacija in solarizacija sta imeli na rast in rodnost jagod v lončnih poskusih, v primerjavi z dazometom pozitiven vpliv, v primerjavi s kontrolo pa sta bili večji ali enaki. V povprečju je bila najbolj učinkovita biocidna rastlina Sa. V poljskem poskusu biofumigacija in solarizacija nista imeli vpliva na rast in rodnost. Biofumigacija je v lončnih poskusih vplivala na povečanje organske snovi in posameznih hranil v substratih. Na manjše število plevelov je v lončnih poskusih vplivala Sa, vendar delovanje ni bilo enako dazometu. Ostala obravnavanja so bila izenačena s kontrolo. V poljskem poskusu statistično značilnih razlik v številu plevelov med obravnavanji ni bilo, kljub temu da je bil učinek solarizacije s prozorno folijo enak učinku dazometa. Vpliv razkuževanja na DSE in nepoznane koreninske endofite je bil v vseh poskusih neizrazit. Z biocidnimi rastlinami smo v zemljo vnesli različne vrste in količine glukozinolatov, ki so na mikorizno kolonizacijo v lončnih poskusih različno delovali. V primerjavi s kontrolo, na parametre mikoriznosti (frekvenca in intenziteta mikorize, gostota arbuskulov) niso vplivali, razen v drugem poskusu v obravnavanjih Bj in Sa. V poljskem poskusu vplivov na mikorizno kolonizacijo ni bilo. Frekvenca mikorize je bila v naših poskusih zelo velika, z izjemo v obravnavanjih z dazometom. Razmerja pri ostalih parametrih mikoriznosti so bila podobna frekvenci. Solarizacija ni vplivala na spremembe mikorizne kolonizacije. Prozorna folija in daljše obdobje prekrivanje tal sta imeli večji, vendar ne statistično značilen vpliv na manjšo prisotnost mikoriznih gliv. Dazomet je v lončnih poskusih preprečil mikorizno kolonizacijo, v poljskem poskusu pa vpliva ni bilo. Ob dodatku mikoriznega inokuluma je bila, mikorizna kolonizacija v lončnih poskusih v vseh obravnavanjih enaka kontroli. Z molekulskimi tehnikami PCR in TTGE smo delno identificirali vrste gliv Glomus spp. in Rhizoctonia sp. Biocidna rastlina Es je vplivala na manjšo diverziteto arbuskularne mikorize. Prisotnosti DSE gliv nismo potrdili. III Koron D. Pomen alternativnih metod razkuževanja tal…mikorize jagode (F. x ananassa Duch.). Dokt. disertacija. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, 2014 KEY WORDS DOCUMENTATION DN Dd DC UDC 581.1:634.753(043.3)=163.6 CX Strawberry/soil disinfection/biofumigation/solarization/ arbuscular mycorrhiza/dark septate endophyte/mycorrhizal colonization/TTGE/growth/ yield/ weeds AU M.Sc. KORON, Darinka, univ. dipl. ing. agr. AA REGVAR, Marjana (supervisor) PP SLO, 1000 Ljubljana, Večna pot 111 PB University of Ljubljana, Biotechnical Faculty, Department of Biology PY 2014 TI Importance of alternative soil disinfection for arbuscular mycorrhiza of strawberry (Fragaria x ananassa Duch.) DT Doctoral dissertation NO XII, 113 p., 21 tab., 23 fig., 22 ann., 236 ref. LA sl AL sl/en AB The impact of biofumigation and solarization on strawberry (Fragaria x ananassa Duch.) growth, yield, and arbuscular mycorrhiza in pot and field experiment was compared to the chemical disinfection with dazomet and to the control treatment. Half of the plants in the pot experiments were inoculated with natural mycorrhizal inoculum. Biofumigation was performed by adding the Brassica juncea (Bj), Sinapis alba (Sa) and Eruca sativa (Es) ground plants. Solarization was performed by soil heating to 37 °C (200 hours). Biofumigation in the field experiment was carried out with biocidal plants (Bj, Sa and Es) and the non-biocidal plant Vicia faba var. minor (Vf). Solarization was carried out with black and transparent foil covering (6 and 9 weeks). In comparison to dazomet, biofumigation and solarization in pot experiments had positive influence on growth and yield, but in comparison to the control, the growth and yield were better or the same. On average, the most effective biocidal plant was Sa. In the field experiment biofumigation and solarization had no impact on growth and yield. In the pot experiments biofumigation resulted in the increase of organic matter and nutrients in substrates. Sa reduced the number of weeds in the pot experiments, but not the same as chemical disinfection. Other treatments have been equalized with the control. There was no differences in the field experiment between treatments even solarization with transparent foil had the same impact on weeds as dazomet. The impact of disinfection on DSE and unknown root endophytes was unexpressed. Depending on biocidal plant, different types and amount of glucosinolates were incorporated into the soil and affect mycorrhizal colonization in trials. In comparison to the control parameters of mycorrhiza (frequency, intensity of colonisation, arbuscular density) had no impact, except in the second experiment, the treatment Bj and Sa. In the field experiment there was no impact on myciorrhizal colonization. In our experiments the frequency of mycorrhiza, except in the dazomet treatment, was very high. The relations in other mycorrhizal parameters were very similar to frequency. Solarization has no impact on mycorrhizal colonization. Transparent foil and a longer period covering the soil had a great, but not statistical significant impact on the mycorrhizal fungi. In pot experiment dazomet prevent mycorrhizal colonization, but not in the field experiment. Treatments with mycorrhizal inoculums have the same mycorrhizal colonization as the control. With molecular techniques PCR and TTGE we identified Glomus spp. in Rhizoctonia sp. Biocidal plant Es affected the diversity of arbuscular mycorrhiza. DSE fungi were not identified. IV Koron D. Pomen alternativnih metod razkuževanja tal…mikorize jagode (F. x ananassa Duch.). Dokt. disertacija. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, 2014 KAZALO VSEBINE str. KLJUČNA DOKUMENTACIJSKA INFORMACIJA ....................................................... III KAZALO VSEBINE ............................................................................................................ V KAZALO PREGLEDNIC ................................................................................................... IX KAZALO SLIK .................................................................................................................... X KAZALO PRILOG ............................................................................................................. XI OKRAJŠAVE IN SIMBOLI .............................................................................................. XII 1 UVOD ................................................................................................................... 1 2 PREGLED OBJAV ............................................................................................. 3 2.1 Klasične tehnologije priprave tal ....................................................................... 3 2.1.1 Kolobarjenje .......................................................................................................... 3 2.1.2 Zaporedno sajenje ................................................................................................. 4 2.2 Alternativne tehnologije priprave tal ................................................................ 6 2.2.1 Nova kemična sredstva za razkuževanje tal .......................................................... 6 2.2.2 Nekemični načini razkuževanja tal ....................................................................... 7 2.2.2.1 Solarizacija ............................................................................................................ 7 2.2.2.2 Biofumigacija ........................................................................................................ 9 2.2.2.2.1 Biocidne rastline ................................................................................................. 10 2.2.2.2.2 Glukozinolati ....................................................................................................... 11 2.2.3 Druga alternativna sredstva za razkuževanje tal ................................................. 12 2.3 Odziv rastlin in MO v tleh na alternativne metode razkuževanja tal .......... 13 2.3.1 Mikoriza .............................................................................................................. 13 2.3.1.1 Arbuskularna mikoriza pri jagodah .................................................................... 14 2.3.2 Temni septirani endofiti ...................................................................................... 15 2.3.3 Škodljive glive na koreninah jagod ..................................................................... 16 2.3.4 Interakcija med mikoriznimi glivami in škodljivimi organizmi ......................... 16 2.4 Določanje AM in DSE gliv ............................................................................... 17 2.4.1 Konvencionalno in molekulsko določanje AM gliv ........................................... 17 2.4.2 Določanje DSE in ostalih koreninskih endofitov ................................................ 18 3 NAMEN IN HIPOTEZE .................................................................................. 20 3.1 Namen ................................................................................................................ 20 3.2 Hipoteze ............................................................................................................. 21 4 MATERIAL IN METODE .............................................................................. 22 4.1 Lončni poskusi ................................................................................................... 22 4.1.1 Zasnova poskusov ............................................................................................... 22 4.1.2 Vzgoja mikoriznega inokuluma .......................................................................... 22 4.1.3 Priprava substratov oz. mešanic zemlje .............................................................. 22 4.1.3.1 Substrati z biocidnimi rastlinami (Bj, Sa, Es) ..................................................... 23 4.1.3.2 Solarizacija – toplotno obdelana zemlja (SOL) .................................................. 24 4.1.3.3 Dazomet - kemično razkužena zemlja (D) .......................................................... 24 4.1.3.4 Kontrola (K) ........................................................................................................ 24 4.1.4 Gojenje sadik ...................................................................................................... 24 4.1.5 Spremljanje parametrov rasti in razvoja jagod ................................................... 25 4.1.6 Spremljanje parametrov rodnosti ........................................................................ 25 4.1.7 Rast plevelnih rastlin ........................................................................................... 25 4.1.8 Ocenjevanje parametrov mikorizne in nemikorizne kolonizacije....................... 25 V Koron D. Pomen alternativnih metod razkuževanja tal…mikorize jagode (F. x ananassa Duch.). Dokt. disertacija. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, 2014 4.1.8.1 Odvzem korenin .................................................................................................. 25 4.1.8.2 Barvanje korenin z barvilom tripan modro ......................................................... 26 4.1.8.3 Priprava preparatov za mikroskopiranje ............................................................. 26 4.1.8.4 Ocena kolonizacije korenin jagod z mikorizo..................................................... 26 4.1.8.5 Ocena veziklov AM ............................................................................................ 27 4.1.8.6 Ocena DSE in nepoznanih koreninskih endofitov .............................................. 27 4.1.8.7 Fotografiranje preparatov .................................................................................... 27 4.1.9 Molekulska identifikacija gliv z začetnimi oligonukleotidi, specifičnimi za glomeromicete ..................................................................................................... 27 4.1.9.1 Odbira in odvzem vzorcev .................................................................................. 27 4.1.9.2 Izolacija DNA iz korenin .................................................................................... 28 4.1.9.3 Verižna reakcija s polimerazo (PCR).................................................................. 28 4.1.9.3.1 PCR z začetnima oligonukleotidoma AM1 in NS31 .......................................... 28 4.1.9.3.2 PCR z začetnima oligonukleotidoma MH2 in MH4 ........................................... 29 4.1.9.3.3 Elektroforeza na agaroznem gelu ........................................................................ 29 4.1.9.3.4 Pomnoževanje za TTGE ..................................................................................... 30 4.1.9.4 TTGE .................................................................................................................. 31 4.1.9.4.1 Priprava gela za analizo TTGE ........................................................................... 31 4.1.9.4.2 Nanos vzorcev ..................................................................................................... 32 4.1.9.4.3 Elektroforeza na poliakrilamidnem gelu ............................................................. 32 4.1.9.4.4 Ocena diverzitete gliv na osnovi TTGE profilov ................................................ 32 4.1.9.4.5 Izolacija DNA iz TTGE gela .............................................................................. 32 4.1.9.4.6 Kloniranje ........................................................................................................... 33 4.1.9.4.7 Sekvenciranje ...................................................................................................... 33 4.1.10 Molekulska identifikacija gliv z začetnimi oligonukleotidi za regijo ITS .......... 34 4.1.10.1 Odbira vzorcev .................................................................................................... 34 4.1.10.2 Verižna reakcija s polimerazo (PCR).................................................................. 34 4.1.10.2.1 PCR z začetnima oligonukleotidoma ITS 1 f in ITS 4 ....................................... 34 4.1.10.2.2 Elektroforeza na agaroznem gelu ....................................................................... 35 4.1.10.2.3 PCR z začetnima oligonukleotidoma ITS 4 in ITS 3 GC ................................... 35 4.1.10.3 TTGE .................................................................................................................. 36 4.1.10.3.1 Izolacija DNA iz TTGE gela .............................................................................. 36 4.1.10.3.2 Kloniranje in sekvenciranje ................................................................................ 36 4.2 Poljski poskus .................................................................................................... 37 4.2.1 Zasnova poskusa ................................................................................................. 37 4.2.2 Lastnosti tal pred obdelavo ................................................................................. 37 4.2.3 Načini obdelave tal za posamezna obravnavanja ................................................ 37 4.2.3.1 Biocidne rastline ................................................................................................. 38 4.2.3.2 Solarizacija .......................................................................................................... 38 4.2.3.3 Kemično razkuževanje tal ................................................................................... 39 4.2.3.4 Kontrola .............................................................................................................. 39 4.2.4 Sadilni material in sajenje ................................................................................... 39 4.2.5 Spremljanje parametrov rasti in razvoja jagod ................................................... 39 4.2.6 Spremljanje parametrov rodnosti ........................................................................ 40 4.2.7 Zapleveljenost ..................................................................................................... 40 4.2.8 Ocenjevanje parametrov mikorizne in nemikorizne kolonizacije....................... 40 4.3 Obdelava podatkov ........................................................................................... 40 5 REZULTATI ..................................................................................................... 41 VI Koron D. Pomen alternativnih metod razkuževanja tal…mikorize jagode (F. x ananassa Duch.). Dokt. disertacija. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, 2014 5.1 Lončni poskusi ................................................................................................... 41 5.1.1 Lastnosti zemlje in substratov oz. mešanic zemlje pred in po poskusu .............. 41 5.1.2 Vpliv alternativnih metod razkuževanja na parametre rasti in rodnosti jagod ... 42 5.1.2.1 Intenzivnost rasti jagod ....................................................................................... 42 5.1.2.2 Rodnost jagod ..................................................................................................... 44 5.1.3 Vpliv alternativnih metod razkuževanja tal na prisotnost plevelnih rastlin ........ 46 5.1.4 Mikorizna in nemikorizna kolonizacija korenin jagod ....................................... 47 5.1.4.1 Frekvenca mikorize (F%).................................................................................... 47 5.1.4.2 Intenziteta mikorize (M%) in intenziteta mikorize v koloniziranih delih korenin (m%) ...................................................................................................... 49 5.1.4.3 Gostota arbuskulov (A%) in gostota arbuskulov v koloniziranih delih korenin (a%) ..................................................................................................................... 50 5.1.4.4 Delež rastlin z vezikli .......................................................................................... 51 5.1.4.5 Kolonizacija rastlin z DSE in nepoznanimi koreninskimi endofiti..................... 52 5.1.5 Molekulska identifikacija gliv z začetnimi oligonukleotidi, specifičnimi za glomeromicete ..................................................................................................... 54 5.1.5.1 PCR z začetnima oligonukleotidoma AM1 in NS31 .......................................... 55 5.1.5.2 PCR z začetnima oligonukleotidoma MH2 in MH4 ........................................... 56 5.1.5.3 Pomnoževanje za TTGE ..................................................................................... 57 5.1.5.4 Analiza TTGE ..................................................................................................... 57 5.1.6 Molekulska identifikacija gliv z začetnimi oligonukleotidi za regijo ITS .......... 59 5.1.6.1 PCR z začetnima oligonukleotidoma ITS 1 f in ITS 4 ....................................... 59 5.1.6.2 PCR z začetnima oligonukleotidoma ITS 4 in ITS 3 GC ................................... 60 5.1.6.3 Analiza TTGE ..................................................................................................... 60 5.2 Poljski poskus .................................................................................................... 62 5.2.1 Vpliv alternativnih metod razkuževanja na parametre rasti in rodnosti jagod ... 62 5.2.1.1 Intenzivnost rasti jagod ....................................................................................... 62 5.2.1.2 Rodnost jagod ..................................................................................................... 62 5.2.2 Vpliv alternativnih metod razkuževanja tal na prisotnost plevelnih rastlin ........ 63 5.2.3 Mikorizna in nemikorizna kolonizacija korenin jagod ....................................... 64 5.3 Primerjava vplivov alternativnih metod razkuževanja na jagode ............... 66 5.3.1 Primerjava med lončnimi in poljskim poskusom ................................................ 66 5.3.2 Primerjava vplivov alternativnih metod razkuževanja na merjene parametre .... 67 5.3.3 Medsebojni vplivi merjenih parametrov ............................................................. 71 6 RAZPRAVA ...................................................................................................... 72 6.1 Alternativne metode razkuževanja tal in založenost s hranili ...................... 72 6.2 Vpliv alternativnih oblik razkuževanja tal na parametre rasti in rodnosti jagod ................................................................................................................... 73 6.2.1 Biofumigacija ...................................................................................................... 73 6.2.2 Solarizacija .......................................................................................................... 74 6.2.3 Inokulacija z AM glivami ................................................................................... 75 6.3 Zapleveljenost .................................................................................................... 77 6.3.1 Biofumigacija in zapleveljenost .......................................................................... 77 6.3.2 Solarizacija in zapleveljenost .............................................................................. 78 6.4 Mikorizna kolonizacija jagod in razkuževanje tal ......................................... 78 6.4.1 Vpliv biocidnih rastlin na mikorizno kolonizacijo ............................................. 80 6.4.2 Vpliv solarizacije na mikorizno kolonizacijo ..................................................... 82 6.4.3 Vpliv dazometa na mikorizno kolonizacijo ........................................................ 84 VII Koron D. Pomen alternativnih metod razkuževanja tal…mikorize jagode (F. x ananassa Duch.). Dokt. disertacija. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, 2014 6.5 DSE in nepoznani koreninski endofiti ter alternativne metode razkuževanja tal ................................................................................................ 84 6.6 Molekulska identifikacija AM, DSE in koreninskih endofitov ..................... 85 6.7 Sklepi .................................................................................................................. 86 7 POVZETEK (SUMMARY) ............................................................................. 88 8 VIRI .................................................................................................................... 96 ZAHVALA PRILOGE VIII Koron D. Pomen alternativnih metod razkuževanja tal…mikorize jagode (F. x ananassa Duch.). Dokt. disertacija. Ljubljana, Univ. v Ljubljani, Biotehniška fakulteta, 2014 KAZALO PREGLEDNIC Preglednica 1: Obravnavanja in oznake obravnavanj v lončnih poskusih ........................ 23 Preglednica 2: Številka in izvor vzorca za molekulsko identifikacijo mikoriznih in DSE gliv oz. nepoznanih koreninskih endofitov ....................................... 27 Preglednica 3: Sestavine mešanice za pomnoževanje PCR z AM1 in NS31 .................... 28 Preglednica 4: Parametri cikla za pomnoževanje DNA z AM1 in NS31 .......................... 29 Preglednica 5: Parametri cikla za pomnoževanje DNA z MH2 in MH4........................... 29 Preglednica 6: Sestavine mešanice za pomnoževanje PCR z NS31-GC in Glo1 .............. 30 Preglednica 7: Parametri cikla za pomnoževanje DNA - Glo1 ......................................... 30 Preglednica 8: Izvor in številka vzorca za molekulsko identifikacijo mikoriznih gliv, DSE in nepoznanih koreninskih endofitov ................................................ 34 Preglednica 9: Sestavine mešanice za pomnoževanje PCR z ITS 1 f in ITS 4 ................. 35 Preglednica 10: Parametri cikla za pomnoževanje DNA .................................................... 35 Preglednica 11: Sestavine mešanice za pomnoževanje PCR z ITS 4 in ITS 3 GC ............. 36 Preglednica 12: Načini obdelave tal, obravnavanja v poljskem poskusu in oznake obravnavanj ............................................................................................... 38 Preglednica 13: Kemična analiza zemlje za substrate in analiza substratov iz LP II po zaključenem poskusu ................................................................................. 41 Preglednica 14: Masa listov na rastlino v LP III ................................................................. 44 Preglednica 15: Število plodov na rastlino v LP III ............................................................ 46 Preglednica 16: Delež rastlin z vezikli v lončnih poskusih, 7 tednov po sajenju (%) ......... 52 Preglednica 17: Delež rastlin z DSE oz. nepoznanimi koreninskimi endofiti v lončnih poskusih, 7 tednov po sajenju (%) ............................................................. 54 Preglednica 18: Oznaka vzorca in številka fragmenta izrezanega iz poliakrilamidnega gela ter oznaka klonov za sekvenciranje ................................................... 58 Preglednica 19: Identifikacija sekvenc iz TTGE ................................................................. 59 Preglednica 20: Izvor vzorca in številka fragmenta izrezanega iz poliakrilamidnega gela . 60 Preglednica 21: Identifikacija sekvenc DSE in nepoznanih koreninskih endofitov ............ 61 IX