(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:6)(cid:7)(cid:8)(cid:4)(cid:9)(cid:6)(cid:1)(cid:10)(cid:6)(cid:1)(cid:11)(cid:4)(cid:6)(cid:12)(cid:6)(cid:1) (cid:13)(cid:14)(cid:15)(cid:2)(cid:11)(cid:9)(cid:6)(cid:1)(cid:10)(cid:6)(cid:1)(cid:16)(cid:6)(cid:10)(cid:6)(cid:15)(cid:4)(cid:3)(cid:6)(cid:1)(cid:5)(cid:6)(cid:9)(cid:6)(cid:7)(cid:4)(cid:3)(cid:14)(cid:4)(cid:7)(cid:6)(cid:1) (cid:10)(cid:6)(cid:17)(cid:14)(cid:7)(cid:9)(cid:6)(cid:16)(cid:6)(cid:3)(cid:9)(cid:1)(cid:10)(cid:6)(cid:8)(cid:1)(cid:8)(cid:15)(cid:4)(cid:6)(cid:3)(cid:15)(cid:6)(cid:8)(cid:1)(cid:15)(cid:11)(cid:4)(cid:3)(cid:4)(cid:18)(cid:2)(cid:6)(cid:8)(cid:1) (cid:8)(cid:6)(cid:7)(cid:5)(cid:4)(cid:15)(cid:6)(cid:1)(cid:10)(cid:6)(cid:1)(cid:16)(cid:6)(cid:10)(cid:6)(cid:15)(cid:4)(cid:3)(cid:6)(cid:1)(cid:10)(cid:6)(cid:8)(cid:1)(cid:19)(cid:4)(cid:8)(cid:6)(cid:14)(cid:2)(cid:20)(cid:21)(cid:1)(cid:11)(cid:14)(cid:12)(cid:19)(cid:16)(cid:19)(cid:7)(cid:17)(cid:22)(cid:6)(cid:8)(cid:1)(cid:6)(cid:9)(cid:1)(cid:7)(cid:19)(cid:3)(cid:12)(cid:6)(cid:2)(cid:7)(cid:8)(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:14)(cid:23)(cid:24)(cid:25)(cid:26)(cid:27)(cid:28)(cid:27)(cid:1)(cid:29)(cid:24)(cid:30)(cid:31) !"#(cid:25)#$"%&(cid:28)(cid:27)(cid:1)(cid:31)!(cid:24)'"(cid:31)"#(cid:23)(cid:23)(cid:28)(cid:25)(cid:25)(cid:28)(cid:27)(cid:1)(cid:28)(cid:31)(cid:1)(#(cid:25) (cid:30)&(cid:25)(cid:24)"!(cid:28)(cid:27)(cid:1)'(cid:28)(cid:1) (cid:25))"(cid:23)#(cid:30)&(cid:25)&((cid:1)'(cid:28)(cid:1)! * !(cid:28)(cid:23)(cid:30)(cid:28)(cid:1)'(cid:28)(cid:1)(cid:25))(cid:28)(cid:23)(cid:31) !#+(cid:24)(cid:31),"(cid:28)(cid:1) +"-##(cid:31)"%&(cid:28)(cid:1)'&(cid:1) (cid:25)(cid:24)+"(cid:23)(cid:1).(cid:9)(cid:6)(cid:15)/0(cid:1)(cid:28)(cid:31)(cid:1)'(cid:28)(cid:1)(cid:27)(cid:28)(cid:27)(cid:1)*!(cid:24)(cid:30)(cid:31)"#(cid:23)(cid:27)1(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:3)(cid:24)(cid:31),(cid:24)(cid:25)"(cid:28)(cid:1)(cid:22)(cid:2)23(cid:6)(cid:3)(cid:8)(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:16)(cid:6)(cid:16)(cid:19)(cid:4)(cid:7)(cid:6)(cid:1)(cid:17)(cid:7)(cid:6)(cid:8)(cid:6)(cid:3)(cid:9)(cid:6)(cid:1)(cid:6)(cid:3)(cid:1)(cid:5)(cid:2)(cid:6)(cid:1)(cid:10)(cid:6)(cid:1)(cid:11)4(cid:19)3(cid:9)(cid:6)(cid:3)(cid:9)(cid:4)(cid:19)(cid:3)(cid:1)(cid:10)(cid:2)(cid:1)(cid:10)(cid:4)(cid:17)(cid:11)5(cid:16)(cid:6)(cid:1) (cid:10)4(cid:6)(cid:9)(cid:2)(cid:10)(cid:6)(cid:8)(cid:1)(cid:14)(cid:17)(cid:17)(cid:7)(cid:19)(cid:13)(cid:19)(cid:3)(cid:10)(cid:4)(cid:6)(cid:8)(cid:1)(cid:6)(cid:3)(cid:1)(cid:8)(cid:15)(cid:4)(cid:6)(cid:3)(cid:15)(cid:6)(cid:8)(cid:1)(cid:5)(cid:6)(cid:9)(cid:6)(cid:7)(cid:4)(cid:3)(cid:14)(cid:4)(cid:7)(cid:6)(cid:1) (cid:19)(cid:7)(cid:4)(cid:6)(cid:3)(cid:9)(cid:14)(cid:9)(cid:4)(cid:19)(cid:3)(cid:1)(cid:16)(cid:6)(cid:10)(cid:6)(cid:15)(cid:4)(cid:3)(cid:6)(cid:1)(cid:5)(cid:6)(cid:9)(cid:6)(cid:7)(cid:4)(cid:3)(cid:14)(cid:4)(cid:7)(cid:6)(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:14)(cid:3)(cid:3)(cid:6)(cid:6)(cid:1)(cid:14)(cid:15)(cid:14)(cid:10)(cid:6)(cid:16)(cid:4)(cid:18)(cid:2)(cid:6)(cid:1)67789677:(cid:1) (cid:7)(cid:28)((cid:28)!(cid:30)"(cid:28)((cid:28)(cid:23)(cid:31)(cid:27)(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:2)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:1)(cid:6)(cid:7)(cid:8)(cid:9)(cid:3)(cid:10)(cid:6)(cid:1)(cid:11)(cid:12)(cid:1)(cid:5)(cid:13)(cid:12)(cid:14)(cid:15)(cid:1)(cid:16)(cid:1)(cid:10)(cid:12)(cid:17)(cid:12)(cid:10)(cid:18)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:17)(cid:3)(cid:14)(cid:1)(cid:19)(cid:10)(cid:3)(cid:17)(cid:3)(cid:5)(cid:12)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:20)(cid:13)(cid:6)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:21)(cid:8)(cid:10)(cid:22)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:19)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:22)(cid:7)(cid:8)(cid:13)(cid:6)(cid:12)(cid:1) (cid:23)(cid:4)(cid:7)(cid:13)(cid:22)(cid:1)(cid:17)(cid:7)(cid:8)(cid:1)(cid:8)(cid:19)(cid:19)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:24)(cid:1)(cid:6)(cid:8)(cid:14)(cid:15)(cid:1)(cid:22)(cid:7)(cid:3)(cid:10)(cid:13)(cid:12)(cid:14)(cid:5)(cid:8)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:17)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:5)(cid:10)(cid:8)(cid:25)(cid:8)(cid:4)(cid:26)(cid:1)(cid:8)(cid:13)(cid:14)(cid:15)(cid:13)(cid:1)(cid:23)(cid:4)(cid:12)(cid:1)(cid:19)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:1)(cid:5)(cid:12)(cid:17)(cid:19)(cid:15)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:24)(cid:1)(cid:8)(cid:4)(cid:26)(cid:1) (cid:6)(cid:13)(cid:25)(cid:12)(cid:10)(cid:15)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:12)(cid:5)(cid:1)(cid:14)(cid:3)(cid:17)(cid:9)(cid:10)(cid:12)(cid:4)(cid:15)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:18)(cid:3)(cid:10)(cid:10)(cid:12)(cid:18)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:15)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:18)(cid:12)(cid:1)(cid:17)(cid:24)(cid:17)(cid:3)(cid:13)(cid:10)(cid:12)(cid:27)(cid:1)(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:28)(cid:14)(cid:1) (cid:29)(cid:10)(cid:8)(cid:14)(cid:6)(cid:1) (cid:17)(cid:12)(cid:10)(cid:18)(cid:13)(cid:1) (cid:24)(cid:29)(cid:8)(cid:22)(cid:12)(cid:17)(cid:12)(cid:14)(cid:5)(cid:1) (cid:16)(cid:1) (cid:21)(cid:13)(cid:30)(cid:8)(cid:13)(cid:1) (cid:31) (cid:8)(cid:22)(cid:3)(cid:1) (cid:23)(cid:4)(cid:13)(cid:1) (cid:8)(cid:1) (cid:15)(cid:4)(cid:1) (cid:17)(cid:7)(cid:8)(cid:13)(cid:29)(cid:4)(cid:13)(cid:22)(cid:22)(cid:12)(cid:10)(cid:1) (cid:6)(cid:8)(cid:14)(cid:15)(cid:1) (cid:22)(cid:8)(cid:1) (cid:10)(cid:12)(cid:18)(cid:30)(cid:12)(cid:10)(cid:18)(cid:30)(cid:12)(cid:1)(cid:12)(cid:5)(cid:1)(cid:22)(cid:7)(cid:13)(cid:14)(cid:5)(cid:12)(cid:10)(cid:19)(cid:10)(cid:24)(cid:5)(cid:8)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:10)(cid:24)(cid:15)(cid:4)(cid:22)(cid:5)(cid:8)(cid:5)(cid:15)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:9)(cid:13)(cid:3)(cid:22)(cid:3)(cid:29)(cid:13)(cid:12)(cid:1)(cid:17)(cid:3)(cid:22)(cid:24)(cid:18)(cid:4)(cid:22)(cid:8)(cid:13)(cid:10)(cid:12)(cid:27)(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:21)(cid:12)(cid:10)(cid:18)(cid:13)(cid:1)(cid:16)(cid:1)!(cid:4)(cid:22)(cid:13)(cid:12)(cid:14)(cid:1)(cid:19)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:5)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:17)(cid:8)(cid:14)(cid:13)(cid:19)(cid:4)(cid:22)(cid:8)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:15)(cid:1)(cid:12)""(cid:12)(cid:18)(cid:5)(cid:4)(cid:24)(cid:12)(cid:15)#(cid:1)(cid:3)(cid:14)(cid:1)(cid:8)(cid:4)(cid:10)(cid:8)(cid:1)(cid:8)(cid:19)(cid:19)(cid:10)(cid:13)(cid:15)(cid:1)(cid:23)(cid:4)(cid:12)(cid:1) (cid:10)(cid:13)(cid:12)(cid:14)(cid:1)(cid:14)(cid:12)(cid:1)"(cid:3)(cid:14)(cid:18)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:14)(cid:12)(cid:1)(cid:11)(cid:8)(cid:17)(cid:8)(cid:13)(cid:15)(cid:1)(cid:6)(cid:4)(cid:1)(cid:19)(cid:10)(cid:12)(cid:17)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:18)(cid:3)(cid:4)(cid:19)(cid:1)$(cid:14)(cid:13)(cid:1)(cid:17)%(cid:17)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:4)(cid:1)(cid:15)(cid:12)(cid:18)(cid:3)(cid:14)(cid:6)&#(cid:1)(cid:15)(cid:4)(cid:10)(cid:5)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:1)(cid:6)(cid:8)(cid:14)(cid:15)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:1) (cid:10)(cid:12)(cid:18)(cid:30)(cid:12)(cid:10)(cid:18)(cid:30)(cid:12)(cid:1)'(cid:1) (cid:1) (cid:1) !(cid:12)(cid:1)(cid:10)(cid:12)(cid:17)(cid:12)(cid:10)(cid:18)(cid:13)(cid:12)(cid:1)(cid:24)(cid:29)(cid:8)(cid:22)(cid:12)(cid:17)(cid:12)(cid:14)(cid:5)(cid:1)(cid:22)(cid:7)(cid:12)(cid:14)(cid:15)(cid:12)(cid:17)(cid:9)(cid:22)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:4)(cid:1)(cid:15)(cid:12)(cid:10)(cid:25)(cid:13)(cid:18)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:7)(cid:8)(cid:25)(cid:13)(cid:8)(cid:13)(cid:10)(cid:12)(cid:1)((cid:1))(cid:22)(cid:13)(cid:14)(cid:12)#(cid:1))(cid:14)(cid:8)(cid:15)(cid:5)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:13)(cid:3)(cid:15)#(cid:1) *(cid:30)(cid:8)(cid:10)(cid:22)(cid:13)(cid:12)(cid:1)(cid:12)(cid:5)(cid:1)(cid:21)(cid:8)(cid:10)(cid:18)(cid:1)(cid:19)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:22)(cid:7)(cid:8)(cid:18)(cid:18)(cid:4)(cid:12)(cid:13)(cid:22)(cid:1)(cid:12)(cid:5)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:1)(cid:9)(cid:3)(cid:14)(cid:14)(cid:12)(cid:1)(cid:8)(cid:17)(cid:9)(cid:13)(cid:8)(cid:14)(cid:18)(cid:12)(cid:1)(cid:23)(cid:4)(cid:13)(cid:1)(cid:10)+(cid:29)(cid:14)(cid:12)(cid:14)(cid:5)(cid:1)(cid:13)(cid:18)(cid:13)(cid:27)(cid:1) (cid:1) (cid:1) !(cid:12)(cid:1)(cid:14)(cid:7)(cid:3)(cid:4)(cid:9)(cid:22)(cid:13)(cid:12)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:15)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:1)(cid:15)(cid:12)(cid:10)(cid:25)(cid:13)(cid:18)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:9)(cid:8)(cid:18)(cid:5)(cid:24)(cid:10)(cid:13)(cid:3)(cid:22)(cid:3)(cid:29)(cid:13)(cid:12)(cid:1)(cid:23)(cid:4)(cid:13)(cid:1)(cid:8)(cid:1)(cid:15)(cid:4)(cid:19)(cid:19)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:24)(cid:1)(cid:14)(cid:3)(cid:15)(cid:1)(cid:25)(cid:13)(cid:15)(cid:13)(cid:5)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:12)(cid:5)(cid:1)(cid:14)(cid:3)(cid:15)(cid:1) (cid:23)(cid:4)(cid:12)(cid:15)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:15)(cid:1)(cid:13)(cid:14)(cid:18)(cid:12)(cid:15)(cid:15)(cid:8)(cid:14)(cid:5)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:8)(cid:13)(cid:14)(cid:15)(cid:13)(cid:1)(cid:23)(cid:4)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:15)(cid:1),(cid:1)(cid:12)(cid:17)(cid:19)(cid:10)(cid:4)(cid:14)(cid:5)(cid:15)(cid:1)-(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:13)(cid:25)(cid:12)(cid:10)(cid:15)(cid:1)(cid:10)(cid:24)(cid:8)(cid:18)(cid:5)(cid:13)"(cid:15)(cid:1)(cid:12)(cid:5)(cid:1)(cid:17)(cid:8)(cid:5)(cid:24)(cid:10)(cid:13)(cid:12)(cid:22)(cid:27)(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:28)(cid:14)(cid:1)(cid:5)(cid:3)(cid:4)(cid:5)(cid:1)(cid:29)(cid:10)(cid:8)(cid:14)(cid:6)(cid:1)(cid:17)(cid:12)(cid:10)(cid:18)(cid:13)(cid:1)(cid:16)(cid:1)(cid:20)(cid:3)(cid:17)(cid:13)(cid:14)(cid:13)(cid:23)(cid:4)(cid:12)(cid:1).(cid:13)(cid:18)(cid:3)(cid:13)(cid:15)(cid:1)(cid:19)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:8)(cid:25)(cid:3)(cid:13)(cid:10)(cid:1)(cid:12)""(cid:12)(cid:18)(cid:5)(cid:4)(cid:24)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:13)(cid:14)(cid:3)(cid:18)(cid:4)(cid:22)(cid:8)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:15)(cid:1) (cid:6)(cid:8)(cid:14)(cid:15)(cid:1)(cid:15)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:13)(cid:14)(cid:15)(cid:5)(cid:8)(cid:22)(cid:22)(cid:8)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:15)(cid:1) (cid:1) (cid:1) /(cid:22)(cid:1)(cid:17)(cid:12)(cid:1)(cid:10)(cid:12)(cid:15)(cid:5)(cid:12)(cid:1)(cid:16)(cid:1)(cid:10)(cid:12)(cid:17)(cid:12)(cid:10)(cid:18)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:5)(cid:3)(cid:4)(cid:15)(cid:1)(cid:18)(cid:12)(cid:4)(cid:26)(cid:1)(cid:23)(cid:4)(cid:13)(cid:1)(cid:14)(cid:7)(cid:3)(cid:14)(cid:5)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:15)(cid:1)(cid:9)(cid:12)(cid:15)(cid:3)(cid:13)(cid:14)(cid:1)(cid:6)(cid:7)%(cid:5)(cid:10)(cid:12)(cid:1)(cid:14)(cid:3)(cid:17)(cid:17)(cid:24)(cid:15)(cid:1)(cid:19)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:15)(cid:12)(cid:1) (cid:10)(cid:12)(cid:18)(cid:3)(cid:14)(cid:14)(cid:8)0(cid:5)(cid:10)(cid:12)(cid:1)((cid:1)(cid:1) (cid:17)(cid:8)(cid:1) "(cid:12)(cid:17)(cid:17)(cid:12)(cid:1) (cid:23)(cid:4)(cid:13)#(cid:1) (cid:19)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:1) (cid:6)(cid:12)(cid:15)(cid:1) (cid:10)(cid:8)(cid:13)(cid:15)(cid:3)(cid:14)(cid:15)(cid:1) (cid:23)(cid:4)(cid:13)(cid:1) (cid:17)(cid:7)(cid:24)(cid:18)(cid:30)(cid:8)(cid:19)(cid:19)(cid:12)(cid:14)(cid:5)(cid:1) (cid:19)(cid:8)(cid:10)"(cid:3)(cid:13)(cid:15)#(cid:1) (cid:17)(cid:7)(cid:8)(cid:13)(cid:6)(cid:12)(cid:1) (cid:12)(cid:5)(cid:1) (cid:17)(cid:12)(cid:1) (cid:15)(cid:4)(cid:19)(cid:19)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:12)#(cid:1)(cid:19)(cid:4)(cid:13)(cid:15)(cid:15)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:15)(cid:1)(cid:14)(cid:3)(cid:4)(cid:15)(cid:1)(cid:18)(cid:3)(cid:14)(cid:5)(cid:13)(cid:14)(cid:4)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:8)(cid:13)(cid:14)(cid:15)(cid:13)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:1)(cid:10)(cid:12)(cid:15)(cid:5)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:14)(cid:3)(cid:5)(cid:10)(cid:12)(cid:1)(cid:25)(cid:13)(cid:12)(cid:1)1(cid:1)(cid:1) (cid:17)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:8)(cid:17)(cid:13)(cid:15)(cid:1)(cid:12)(cid:5)(cid:1)(cid:18)(cid:3)2(cid:22)(cid:3)(cid:18)(cid:8)(cid:5)(cid:8)(cid:13)(cid:10)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:23)(cid:4)(cid:13)(cid:1)(cid:3)(cid:14)(cid:5)(cid:1)(cid:5)(cid:3)(cid:4)(cid:11)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:15)(cid:1)(cid:22)(cid:7)(cid:8)(cid:10)(cid:5)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:10)(cid:12)(cid:17)(cid:3)(cid:14)(cid:5)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:1)(cid:17)(cid:3)(cid:10)(cid:8)(cid:22)(cid:1)1(cid:1)(cid:1) (cid:17)(cid:8)(cid:1) "(cid:8)(cid:17)(cid:13)(cid:22)(cid:22)(cid:12)(cid:1) (cid:19)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:1) (cid:22)(cid:12)(cid:4)(cid:10)(cid:1) (cid:8)(cid:19)(cid:19)(cid:10)(cid:3)(cid:9)(cid:8)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1) (cid:13)(cid:14)(cid:18)(cid:3)(cid:14)(cid:6)(cid:13)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:14)(cid:12)(cid:22)(cid:22)(cid:12)(cid:1) (cid:6)(cid:8)(cid:14)(cid:15)(cid:1) (cid:5)(cid:3)(cid:4)(cid:15)(cid:1) (cid:18)(cid:12)(cid:1) (cid:23)(cid:4)(cid:12)(cid:1) (cid:11)(cid:7)(cid:12)(cid:14)(cid:5)(cid:10)(cid:12)(cid:19)(cid:10)(cid:12)(cid:14)(cid:6)(cid:15)(cid:1)1(cid:1) (cid:17)(cid:8)(cid:1)(cid:18)(cid:3)(cid:10)(cid:10)(cid:12)(cid:18)(cid:5)(cid:10)(cid:13)(cid:18)(cid:12)(cid:1)(cid:19)(cid:3)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:15)(cid:8)(cid:1)"(cid:10)(cid:4)(cid:18)(cid:5)(cid:4)(cid:12)(cid:4)(cid:15)(cid:12)(cid:1)(cid:18)(cid:30)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:12)(cid:1)(cid:8)(cid:4)(cid:26)(cid:1)"(cid:8)(cid:4)(cid:5)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:6)(cid:7)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:30)(cid:3)(cid:29)(cid:10)(cid:8)(cid:19)(cid:30)(cid:12)(cid:27)(cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:1) (cid:11)"(cid:27)(cid:31)(cid:28)(cid:1)'(cid:28)(cid:27)(cid:1)(cid:24)(cid:29)! ;"(cid:24)(cid:31)"#(cid:23)(cid:27)(cid:1) (cid:1) (cid:20)(cid:21)3(cid:21)(cid:1)((cid:1)(cid:20)(cid:4)(cid:22)(cid:9)(cid:12)(cid:18)(cid:18)(cid:3)(cid:1)(cid:21)(cid:3)(cid:6)(cid:13)"(cid:13)(cid:12)(cid:6)(cid:1)3(cid:8)(cid:29)(cid:22)(cid:12)(cid:7)(cid:15)(cid:1)(cid:21)(cid:12)(cid:6)(cid:13)(cid:4)(cid:17)(cid:1) 33.(cid:1)((cid:1)3(cid:14)(cid:5)(cid:24)(cid:10)(cid:3)(cid:19)(cid:8)(cid:5)(cid:30)(cid:13)(cid:12)(cid:1)3(cid:19)(cid:13) (cid:3)(cid:3)(cid:5)(cid:13)(cid:23)(cid:4)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:4)(cid:1).(cid:8)(cid:19)(cid:13)(cid:14)(cid:1) 345(cid:31)(cid:1)((cid:1)3(cid:26)(cid:12)(cid:17)(cid:19)(cid:5)(cid:1)(cid:6)(cid:7)4(cid:10)(cid:29)(cid:8)(cid:14)(cid:13)(cid:15)(cid:17)(cid:12)(cid:15)(cid:1)5(cid:8)(cid:5)(cid:30)(cid:3)(cid:29)+(cid:14)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:31)(cid:19)(cid:24)(cid:18)(cid:13)"(cid:13)(cid:23)(cid:4)(cid:12)(cid:15)(cid:1) 67(cid:21)(cid:1)((cid:1)6(cid:8)(cid:13)(cid:14)(cid:1)7(cid:4)(cid:3)(cid:5)(cid:13)(cid:6)(cid:13)(cid:12)(cid:14)(cid:1)(cid:21)(cid:3)8(cid:12)(cid:14)(cid:1) 59(cid:31)(cid:1)((cid:1)5(cid:30)(cid:3)(cid:15)(cid:19)(cid:30)(cid:8)(cid:5)(cid:12)(cid:1)9(cid:4)""(cid:12)(cid:10)(cid:12)(cid:6)(cid:1)(cid:31)(cid:8)(cid:22)(cid:13)(cid:14)(cid:12)(cid:1) 5*:(cid:1)((cid:1)5(cid:3)(cid:22)8(cid:17)(cid:12)(cid:10)(cid:8)(cid:15)(cid:12)(cid:1)*(cid:30)(cid:8)(cid:13)(cid:14)(cid:1):(cid:12)(cid:8)(cid:18)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1) 5.)(cid:1)((cid:1) /(cid:14)(cid:3)(cid:18)(cid:4)(cid:22)(cid:4)(cid:17)(cid:1) (cid:3)(cid:9)(cid:5)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:1) (cid:19)(cid:8)(cid:10)(cid:1) (cid:8)(cid:6)(cid:30)(cid:24)(cid:10)(cid:12)(cid:14)(cid:18)(cid:12)(cid:1) (cid:6)(cid:12)(cid:1) (cid:22)(cid:8)(cid:1) "(cid:10)(cid:8)(cid:18)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1) ;<(cid:1)=(cid:1) (cid:15)(cid:4)(cid:10)(cid:1) (cid:9)(cid:3)(cid:13)(cid:5)(cid:12)(cid:1) (cid:6)(cid:12)(cid:1) (cid:18)(cid:4)(cid:22)(cid:5)(cid:4)(cid:10)(cid:12)(cid:1) (cid:18)(cid:12)(cid:22)(cid:22)(cid:4)(cid:22)(cid:8)(cid:13)(cid:10)(cid:12)(cid:1)(cid:25)(cid:13)(cid:6)(cid:12)(cid:1) :>.5(cid:1)((cid:1):(cid:12)(cid:15)(cid:5)(cid:10)(cid:13)(cid:18)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1)>(cid:10)(cid:8)(cid:29)(cid:17)(cid:12)(cid:14)(cid:5)(cid:1).(cid:12)(cid:14)(cid:29)(cid:5)(cid:30)(cid:1)5(cid:3)(cid:22)8(cid:17)(cid:3)(cid:10)(cid:19)(cid:30)(cid:13)(cid:15)(cid:17)(cid:1) :/?(cid:1)((cid:1)(cid:20)(cid:12)(cid:10)(cid:14)(cid:13)(cid:12)(cid:10)(cid:1)(cid:22)(cid:13)(cid:23)(cid:4)(cid:13)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:10)(cid:13)(cid:14)@(cid:8)(cid:29)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:3)(cid:10)(cid:15)(cid:1)(cid:6)(cid:4)(cid:1)"(cid:10)(cid:8)(cid:18)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:14)(cid:12)(cid:17)(cid:12)(cid:14)(cid:5)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:10)(cid:1)(cid:8)(cid:6)(cid:30)(cid:24)(cid:10)(cid:12)(cid:14)(cid:18)(cid:12)(cid:1)(cid:18)(cid:12)(cid:22)(cid:22)(cid:4)(cid:22)(cid:8)(cid:13)(cid:10)(cid:12)(cid:1) :ABC(cid:1)((cid:1).(cid:13)(cid:29)(cid:14)(cid:24)(cid:12)(cid:1)(cid:18)(cid:12)(cid:22)(cid:22)(cid:4)(cid:22)(cid:8)(cid:13)(cid:10)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:10)(cid:12)(cid:13)(cid:14)(cid:15)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:19)(cid:13)(cid:14)(cid:1)(cid:13)(cid:17)(cid:17)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:8)(cid:22)(cid:13)(cid:15)(cid:24)(cid:12)(cid:1) :A;<B(cid:1)((cid:1)/(cid:14)(cid:3)(cid:18)(cid:4)(cid:22)(cid:4)(cid:17)(cid:1)(cid:3)(cid:9)(cid:5)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:10)(cid:1)(cid:8)(cid:6)(cid:30)(cid:24)(cid:10)(cid:12)(cid:14)(cid:18)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:1)"(cid:10)(cid:8)(cid:18)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1);<(cid:1)=(cid:1)(cid:15)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:18)(cid:12)(cid:22)(cid:22)(cid:4)(cid:22)(cid:12)(cid:15)(cid:1):ABC(cid:1) $(cid:4)(cid:14)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:8)(cid:29)(cid:12)&(cid:1) :A;<D(cid:1)((cid:1)/(cid:14)(cid:3)(cid:18)(cid:4)(cid:22)(cid:4)(cid:17)(cid:1)(cid:3)(cid:9)(cid:5)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:10)(cid:1)(cid:8)(cid:6)(cid:30)(cid:24)(cid:10)(cid:12)(cid:14)(cid:18)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:1)"(cid:10)(cid:8)(cid:18)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1);<(cid:1)=(cid:1)(cid:15)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:18)(cid:12)(cid:22)(cid:22)(cid:4)(cid:22)(cid:12)(cid:15)(cid:1):ABC(cid:1) $(cid:6)(cid:12)(cid:4)(cid:26)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:8)(cid:29)(cid:12)(cid:15)&(cid:1)(cid:1) :(cid:2)25*:(cid:1)((cid:1):(cid:12)(cid:25)(cid:12)(cid:10)(cid:15)(cid:12)(cid:1)(cid:2)(cid:10)(cid:8)(cid:14)(cid:15)(cid:18)(cid:10)(cid:13)(cid:19)(cid:5)(cid:8)(cid:15)(cid:12)(cid:1)5(cid:3)(cid:22)8(cid:17)(cid:12)(cid:10)(cid:8)(cid:15)(cid:12)(cid:1)*(cid:30)(cid:8)(cid:13)(cid:14)(cid:1):(cid:12)(cid:8)(cid:18)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1) (cid:2)3(cid:21)B(cid:1)((cid:1)*(cid:3)(cid:14)(cid:5)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:1)(cid:18)(cid:8)(cid:12)(cid:18)(cid:8)(cid:22)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:19)(cid:13)(cid:14)(cid:1)345(cid:31)(cid:1)(cid:5)(cid:10)(cid:8)(cid:13)(cid:5)(cid:24)(cid:1)(cid:18)(cid:3)(cid:17)(cid:17)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:1)(cid:2)3*#(cid:1)(cid:5)(cid:24)(cid:17)(cid:3)(cid:13)(cid:14)(cid:1)(cid:14)(cid:24)(cid:29)(cid:8)(cid:5)(cid:13)"(cid:1) (cid:2)3(cid:21)D(cid:1)((cid:1)*(cid:3)(cid:14)(cid:5)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:1)(cid:18)(cid:8)(cid:12)(cid:18)(cid:8)(cid:22)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:19)(cid:13)(cid:14)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:18)(cid:3)(cid:17)(cid:19)(cid:8)(cid:29)(cid:14)(cid:13)(cid:12)(cid:1)(cid:14)(cid:3)(cid:14)(cid:1)(cid:17)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:5)(cid:30)(cid:3)(cid:22)(cid:3)(cid:29)(cid:13)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:13)(cid:29)(cid:12)(cid:15)(cid:5)(cid:13)(cid:25)(cid:12)(cid:1)(cid:5)(cid:10)(cid:8)(cid:13)(cid:5)(cid:24)(cid:1) (cid:18)(cid:3)(cid:17)(cid:17)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:1)(cid:2)3*#(cid:1)(cid:5)(cid:24)(cid:17)(cid:3)(cid:13)(cid:14)(cid:1)(cid:14)(cid:24)(cid:29)(cid:8)(cid:5)(cid:13)"(cid:1) (cid:2)3(cid:21)C(cid:1)((cid:1)*(cid:3)(cid:14)(cid:5)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:1)(cid:18)(cid:8)(cid:12)(cid:18)(cid:8)(cid:22)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:19)(cid:13)(cid:14)(cid:1)(cid:6)(cid:7)(cid:24)(cid:22)(cid:12)(cid:25)(cid:8)(cid:29)(cid:12)(cid:1)(cid:14)(cid:3)(cid:14)(cid:1)(cid:17)(cid:3)(cid:10)(cid:5)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:5)(cid:30)(cid:3)(cid:22)(cid:3)(cid:29)(cid:13)(cid:12)(cid:1)(cid:6)(cid:13)(cid:29)(cid:12)(cid:15)(cid:5)(cid:13)(cid:25)(cid:12)(cid:1)(cid:5)(cid:10)(cid:8)(cid:13)(cid:5)(cid:24)(cid:1) (cid:18)(cid:3)(cid:17)(cid:17)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:12)(cid:1)(cid:2)3*#(cid:1)(cid:5)(cid:24)(cid:17)(cid:3)(cid:13)(cid:14)(cid:1)(cid:14)(cid:24)(cid:29)(cid:8)(cid:5)(cid:13)"(cid:1) (cid:2)3*(cid:1)((cid:1) /(cid:14)(cid:3)(cid:18)(cid:4)(cid:22)(cid:4)(cid:17)(cid:1) (cid:6)(cid:12)(cid:1) (cid:10)(cid:24)"(cid:24)(cid:10)(cid:12)(cid:14)(cid:18)(cid:12)(cid:1) (cid:6)(cid:12)(cid:1) (cid:22)(cid:7)33.#(cid:1) (cid:3)(cid:9)(cid:5)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:1) (cid:8)(cid:19)(cid:10)+(cid:15)(cid:1) (cid:6)(cid:13)(cid:22)(cid:4)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)#(cid:1) (cid:18)(cid:12)(cid:14)(cid:5)(cid:10)(cid:13)"(cid:4)(cid:29)(cid:8)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1) (cid:12)(cid:5)(cid:1) "(cid:13)(cid:22)(cid:5)(cid:10)(cid:8)(cid:5)(cid:13)(cid:3)(cid:14)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:18)(cid:3)(cid:14)(cid:5)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:1)(cid:6)(cid:13)(cid:29)(cid:12)(cid:15)(cid:5)(cid:13)"(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:19)(cid:13)(cid:14)(cid:1)(cid:17)(cid:8)(cid:22)(cid:8)(cid:6)(cid:12)(cid:27)(cid:1) (cid:2)3*E(cid:1)((cid:1)E+(cid:17)(cid:12)(cid:1)(cid:13)(cid:14)(cid:3)(cid:18)(cid:4)(cid:22)(cid:4)(cid:17)(cid:1)(cid:6)(cid:12)(cid:1)(cid:10)(cid:24)"(cid:24)(cid:10)(cid:12)(cid:14)(cid:18)(cid:12)#(cid:1)(cid:3)(cid:9)(cid:5)(cid:12)(cid:14)(cid:4)(cid:1)(cid:8)(cid:19)(cid:10)+(cid:15)(cid:1)E(cid:1)(cid:19)(cid:8)(cid:15)(cid:15)(cid:8)(cid:29)(cid:12)(cid:15)(cid:1)(cid:15)(cid:4)(cid:10)(cid:1)(cid:22)(cid:8)(cid:19)(cid:13)(cid:14)(cid:15)(cid:27)(cid:1) (cid:1) Résumé L’entéropathie épizootique du lapin est une pathologie du système digestif causant de lourdes pertes économiques à la cuniculture européenne. L’agent étiologique reste inconnu à ce jour mais un inoculum de référence (TEC4) permet de reproduire la pathologie. L’objectif de ce travail est de mettre en évidence une bactérie ou une séquence d’ADN bactérien spécifique à cet inoculum. Les espèces bactériennes présentes dans cet inoculum ont été séparées par centrifugation sur gradient de sucrose suivi ou non d’un tri par adhérence sur culture de cellules. Ces fractions adhérentes aux cellules de reins de lapins permettent de reproduire la pathologie par inoculation sur lapins sensibles. Les analyses bactériologiques classiques et bactérioscopiques des fractions permettent de mettre en évidence une sélection de la flore au cours des fractionnements. L’analyse par Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) des différentes fractions avec l’enzyme Acc I permet de mettre en évidence une bande d’intérêt spécifique aux inoculums reproduisant la maladie. Mots clés : EEL, fractionnement, bactériologie, restriction, profil 1 Abstract Epizootic rabbit enteropathy is a digestive disease that induces huge economic losses in European rabbit production units. Its aetiology is still unknown but a reference inoculum (TEC4) can reproduce the pathology. The aim of the study is to find a bacteria or a bacterial DNA sequence specific to this inoculum. The bacterial species found in TEC4 were separated by centrifugation on discontinuous sucrose gradient followed or not by a cellular adhesion sorting. The rabbit kidney cells adhering fractions can reproduce the pathology by inoculation on sensitive rabbits. The classical bacteriological and bacterioscopical analyses show a variation and a selection of the flora in the course of the fractionation. Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) analysis with Acc I show a specific pattern for the fraction able to reproduce the pathology. Keywords : ERE, fractionation, bacteriology, restriction, profil 2 Introduction La cuniculture Le lapin européen (Oryctolagus cuniculus), à l’inverse de nombreuses espèces d’animaux de rentes, n’a été domestiqué que tardivement. Les premiers rapports de reproduction en captivité datent de la fin du Moyen-Âge mais, les gourmets de l’époque préférant le lapin sauvage ou de garenne au lapin d’élevage (Lebas, sans date), l’essor de l’élevage rationnel a réellement commencé à la fin du 19ème siècle. Au siècle dernier, des sociétés d’élevage sont créées, des races mutantes non adaptées à la vie sauvage sont sélectionnées (Lebas, et al., 1997). En Belgique, plusieurs races locales sont créées telles que le Géant des Flandres, le Bleu de Beveren, le Blanc de Termonde,… (Filière avicole et cunicole, sans date). Dès les années 50, les petits élevages et les élevages familiaux ont tendance à disparaître suite à l’apparition de la vente de viande congelée et surtout à cause de l’épidémie de myxomatose. Les éleveurs professionnels sont sortis plus ou moins indemnes de cette crise, essentiellement grâce à la vaccination efficace de leur cheptel (Lebas, sans date). Alors que l’industrialisation de l’élevage prend forme vers la fin des années cinquante, les races locales sont remplacées par deux races importées des Etats-Unis : le Néo-Zélandais blanc et le Californien dont la conformation des pattes est plus adaptée au grillage des cages et dont la productivité est supérieure. Les progrès en management et en automatisation des années septante permettent aux éleveurs de gagner du temps sur le nettoyage et l’alimentation. Ayant plus de temps pour s’occuper des animaux, ils mettent en place le sevrage précoce et un hybride néo-zélandais/californien (Lebas, et al., 1997). Dans les années quatre-vingt, quelques grosses unités de productions comportant environ 500 femelles voient le jour en Belgique (Filière avicole et cunicole, sans date). Leur gestion est facilitée par l’insémination artificielle rendue possible par la synthèse d’analogue de la GnRh. La conduite en bandes est mise en place dans beaucoup d’élevages permettant l’égalisation des tailles des portées par adoption des nouveaux-nés (Bolet, 1998). La consommation annuelle mondiale de viande de lapin est de 280g par personne. Une grande variation est remarquée en fonction des pays, de 30g par an et par personne au Japon à 8,8kg par an et par personne à Malte. La viande de lapin est soumise à très peu d’interdits religieux mais, le lapin étant de plus en plus considéré comme un animal de compagnie, sa consommation n’est plus aussi appréciée que par le passé. Vingt pays produisent plus de 80 % de la production mondiale (Lebas, et al., 1997). L’Europe latine est le plus grand producteur et consommateur, l’Italie en tête avec une 3 production de 300 000 tonnes et une consommation annuelle de 5,71 kg par habitant. La Belgique reste le douzième plus grand producteur avec 24 000 tonnes de carcasses par an (Lebas, et al., 1997) grâce à ses 240 000 femelles reproductrices (Filière avicole et cunicole, sans date). La production interne n’étant pas suffisante pour la consommation (5ème mondial) la Belgique importe de la viande de lapin. Les importations proviennent surtout de Hongrie et de Chine (respectivement 95 et 40 % de leur production étant destinée à l’exportation). La consommation de viande de lapin, bien qu’en déclin, reste encore élevée surtout dans les pays d’Europe latine. Il en est de même pour la recherche scientifique, la moitié des communications du 8ème Congrès Mondial de Cuniculture (Puebla - Mexique - Septembre 2004) provenait d’équipes italienne, française et espagnole ! La production belge actuelle est, comme en France, répartie entre les élevages industriels et « artisanaux ». Ces derniers sont relativement difficiles à quantifier mais représentent une portion non négligeable de la production, un quart à un tiers en Belgique (Colin et Lebas, 1995). Malheureusement la production cunicole et spécialement la production vivrière est en déclin dans nos pays ce qui risque d’entraîner une augmentation des importations. Apparition de l’Entéropathie Epizootique du Lapin (EEL) Fin de l’année 1996, début 1997, les premiers cas d’une nouvelle pathologie digestive apparaissent en France en Poitou-Charentes (Duval, 1998). A l’époque, la maladie est improprement appelée entérocolite épizootique du lapin. Certains chercheurs utilisent encore ce terme aujourd’hui, alors qu’en l’absence de complication bactérienne secondaire, une des caractéristiques de cette pathologie est l’absence de signe d’inflammation macroscopique et microscopique notamment du tractus digestif (Licois, 1998, Marlier et Vindevogel, 1998, Dewrée, et al., in press). En moins d’un an, l’entéropathie épizootique (EEL) se répand un peu partout en Europe de l’ouest. Il est difficile d’évaluer la proportion des élevages touchés par cette pathologie car il existe peu d’études épidémiologiques. En Angleterre, 13 éleveurs sur 17 ayant répondu au questionnaire du British Commercial Rabbit Association, prétendent avoir relevé les symptômes d’entéropathie dans leur élevage depuis janvier 1996 (Jones et Duff, 2001). En France, 95 % des élevages ont été ou sont actuellement touchés par l’EEL (Jacquinet, et al., 2001). Il est certain que l’Angleterre, les Pays-Bas, l’Allemagne, la Belgique, la France, l’Italie, la Hongrie et l’Espagne sont touchés de manière importante. La situation épidémiologique s’aggrave en 1999, lorsque la bacitracine de zinc, seul antibiotique relativement efficace pour contrôler les signes cliniques de l’EEL, est interdite 4 d’utilisation chez les animaux destinés à la consommation humaine. Aujourd’hui, à nouveau disponible sur le marché belge, la bacitracine est autorisée en France, en Espagne et aux Pays Bas comme substance médicamenteuse et traitement de l’EEL. Elle est interdite en Italie et en Hongrie. Description de la maladie Les animaux touchés sont, principalement, ceux âgés de 6 à 14 semaines (Marlier et Vindevogel, 1998) mais des cas ont été décrits chez des animaux plus jeunes (Boisot, et al., 2005) et plus âgés, notamment parmi le cheptel reproducteur (Licois, et al., 2000). Les lapins sauvages ne semblent pas touchés contrairement à d’autres pathologies spécifiques du lapin comme la myxomatose et la maladie hémorragique virale. Les signes cliniques retenus pour l’identification de l’EEL en élevage sont : une mortalité importante (30 à 80 %) chez des animaux âgés de 6 à 14 semaines, précédée d’une chute de consommation d’aliment et d’eau ainsi que des ballonnements et bruits d’eau (Duval, 1998). Des symptômes plus inconstants peuvent être retrouvés, comme des impactions caecales, des faibles diarrhées et l’excrétion de mucus. La confirmation de la suspicion d’EEL s’obtient à l’autopsie. Les lésions retrouvées sont une dilatation de tout le tractus digestif y compris de l’estomac (Duval, 1998, Marlier et Vindevogel, 1998). Le contenu digestif est souvent anormalement liquide. Le contenu caecal peut être liquide ou impacté. La présence d’une grosse quantité de mucus peut être remarquée dans le colon voir moins fréquemment dans l’intestin grêle (Coudert, et al., 1997). En l’absence de surinfection, aucun signe d’inflammation n’est remarqué (Licois, 1998) contrairement aux autres pathologies digestives du lapin (Marlier, et al., 2003a). L’EEL est également la seule pathologie dans laquelle une atteinte de l’estomac est systématique. De manière irrégulière, certaines lésions microscopiques peuvent être retrouvées au niveau intestinal, par exemple : des infiltrations leucocytaires de la tunica muscularis, la présence de cellules apoptiques et de débris nucléaires, un atrophie des villosités, un amincissement de la parois,… (Licois, 1998, Licois et Coudert, 1999, Dewrée, et al., in press). Une forte présence de mucus et de bactéries est mise en évidence après coloration à l’hématoxyline et éosine. Au microscope électronique à transmission des bactéries intra cytoplasmique et intercellulaire de type gram - peuvent être mises en évidence (Dewrée, et al., in press). Sur le terrain, l’EEL s’observe souvent conjointement à d’autres pathologies. En effet, elle perturbe grandement l’équilibre de la flore digestive du lapin (Dewree, et al., 2003). Une augmentation du nombre d’Escherichia coli et de Clostridium spp est régulièrement remarquée chez les lapins atteints. En ce qui concerne les Clostridium, les seules toxines retrouvées sont les toxines de type A et C (Dewree, et al., 2003, Marlier, et al., 2006), responsables d’entérite nécrotique chez la 5 volaille et le porc. En plus de perturber l’équilibre de la flore bactérienne, l’EEL augmente l’excrétion des coccidies (Coudert, 2003, Marlier, et al., 2006) pathologie fréquente chez le lapin (Marlier, et al., 2003a), avec lesquels elle agit en synergie, entraînant une mortalité plus élevée (Coudert, et al., 2000a). Le diagnostique final de l’EEL n’est donc pas évident sur le terrain. Il repose essentiellement sur l’aspect épidémiologique dans l’élevage, l’observation des lésions typiques chez un grand nombre d’individus et l’absence d’isolement d’agent pathogène digestif primaire du lapin (Marlier et Vindevogel, 1998). Dès le début de l’épidémie, l’EEL a montré une forte contagiosité (Duval, 1998, Le Gall, et al., 1998, Boisot, et al., 2005). Cette observation a vite permis d’éliminer les causes non biologiques comme étiologie de la pathologie. Il a été démontré que l’agent peu survivre jusqu’à 3 à 4 mois dans l’aliment (Licois, et al., 2000), le rôle vecteur de celui-ci est soulevé par plusieurs auteurs (Licois, et al., 2000, Jobert, et al., 2001, Duperray, et al., 2003). L’enquête de Larour (2004) a permis d’évaluer les facteurs de risques en élevage. La conduite en bande multiple qui entraîne le contact avec des animaux d’âges différents, le transfert des lapereaux au sevrage, l’alimentation ad libitum, l’atteinte de l’élevage par de la pasteurellose chronique, des traitements antibiotiques systématiques ont été reconnu comme des facteurs de risques majeurs. A l’inverse, le lavage des mains de l’éleveur entre la maternité et l’engraissement, une densité faible d’animaux (< à 17 lapins/m²) et le transfert des lapines plutôt que des jeunes au sevrage semblent être des facteurs de protection. Aucun traitement ne permet la disparition totale de l’EEL d’un élevage infecté. Les deux seuls antibiotiques permettant un contrôle de la pathologie sont la bacitracine (Duperray, et al., 2003, Boisot, et al., 2004, Maertens, et al., 2005) et la tiamuline (Coudert, et al., 2000b, Licois, et al., 2000). Dès l’arrêt de ces traitements, les mortalités reprennent (Maertens, et al., 2005). L’addition d’un immunostimulant (MacroGard) entraîne une meilleure réponse au traitement antibiotique, même si, utilisé seul, il n’a aucun effet sur la mortalité et la morbidité (Coudert, et al., 2000b). Le traitement de la coccidiose est un point important dans le contrôle de la mortalité (Coudert, et al., 2000a). L’utilisation systématique de bacitracine permet d’éviter l’apparition de signes cliniques (Richard, et al., 2000, Boisot, et al., 2004) mais est peu recommandée que ce soit au niveau du coût que des réglementations européennes. Le plus important est d’éviter les facteurs de risque décrits par Larour (2004), de respecter les mesures d’hygiène élémentaire et de traiter toute pathologie sous jacente, spécialement la coccidiose. Une immunisation après infection a été décrite par Boisot (2005), de même qu’une transmission d’immunité de la mère au jeune. L’observation d’un élevage infecté et non traité permet de mettre en évidence cette immunité. En effet, les jeunes semblent être immunisés 6 pendant les deux premières semaines post sevrage, peu importe l’âge auquel celui-ci a lieu (Macchioni, et al., 2000). Rochambeau et collaborateurs (2006) quant à eux ont démontré une corrélation entre les animaux résistants à l’EEL et leur origine génétique. Bien que ce lien statistique ait été confirmé par Garreau et collaborateurs (2005), l’héritabilité de cette résistance semble faible. Une sélection génétique pour favoriser la résistance des lapins à l’engraissement serait possible mais ne semble actuellement pas être une solution réalisable en exploitation. Lorsque la pathologie est reproduite sur des lapins exempts d’organismes pathogènes spécifiques (EOPS), le taux de mortalité est beaucoup plus faible que sur le terrain, 20 à 25 % au lieu de 30 à 80 %. Ceci pourrait s’expliquer par l’absence d’agents pathogènes opportunistes dans la flore de lapin EOPS, qui sont par contre, présents chez les lapins conventionnels (Licois, 1998, Marlier, et al., 2006). Si les animaux sont immunodéprimés par des injections de corticoïde, le taux de mortalité post infection est semblable à celui du terrain. L’indicateur le plus intéressant pour juger la reproduction expérimentale est l’évolution du gain quotidien moyen (Licois, 1998). L’évaluation de celui-ci a permis de mettre en évidence une phase précoce de la maladie. Une chute du gain quotidien moyen (GQM) est remarquée dès 18h post inoculation. Il revient à la normale au deuxième ou troisième jour pour chuter à nouveau au jour 5. Lorsque l’inoculum est chauffé 10 minutes à 55°C, seule la phase précoce est retrouvée (Marlier, et al., 2003b, Coudert et Licois, 2005). L’entéropathie épizootique apparue en 1996 présente des ressemblances avec une pathologie décrite depuis la moitié du vingtième siècle : l’entéropathie ou entérite mucoïde. Cette pathologie touche essentiellement les animaux entre 7 et 10 semaines. Les symptômes sont : une profusion de mucus, une dilatation de tout le tractus digestif et une mortalité élevée (Badiola, et al., 2000). L’entéropathie mucoïde sévit essentiellement aux Etats-Unis et en Angleterre, les cas sont plutôt de type sporadique et non épizootique comme l’EEL (Whitwell et Needham, 1996). Cette pathologie est également présente en Belgique (Peeters, 1989). Lors de l’apparition des premiers cas d’EEL en Europe, plusieurs chercheurs ont suspecté l’apparition de l’entéropathie mucoïde en Europe (Badiola, et al., 2000, Guitan, et al., 2000). Aujourd’hui, il est admis que ce sont deux pathologies différentes. Aspect économique En Belgique, les pertes économiques annuelles dues à l’EEL sont évaluées à plus de 10 millions d’euros (Dewree, et al., 2003). Bien que le taux de mortalité semble diminuer (Macchioni, et al., 2000) les éleveurs belges perdent en général, environ 10 % de leur cheptel à cause de l’EEL (De Hertefelt, communication personnelle). 7