Equine Infectious Anemia Virus Antibody Test Kit Kit de détection des anticorps dirigés contre le Virus de l’Anémie Infectieuse Equine Kit para detecção de anticorpos contra o vírus da anemia infecciosa equina USO VETERINÁRIO Kit para la detección de Anticuerpos frente al Virus de la Anemia Infecciosa Equina Testkit zum Nachweis von Antikörpern gegen das Virus der infektiösen Anämie der Pferde Die deutsche Fassung der Gebrauchsinformation ist entsprechend § 17c TierSG zugelassen. IDEXX AGID EIA 06-02212-05 IDEXX AGID EIA IDEXX AGID EIA English Version Equine Infectious Anemia Virus Antibody Test Kit For veterinary use only. Introduction The purified antigen from Equine Infectious Anemia Virus (EIAV) can be used in the agar gel immunodiffusion (AGID) test to detect the presence of antibody against EIAV in the serum of infected horses. Nonspecific precipitin lines are virtually eliminated from the AGID test by using highly purified EIAV antigens. These non-specific precipitin lines can interfere with the reading of the test. Description The movement of antigen and antibody toward one another in an agar gel can result in the formation of precipitin lines. By applying this principle, the AGID test has been shown to reliably detect specific antibody formed after 10 to 30 days of infection with EIAV. Precipitin lines of identity can be visualized in strong positive sera as continuing from the lines between the control serum and center antigen wells. Weakly positive sera are indicated as a bend of the control serum lines towards the antigen well. No precipitin lines of identity form if the s erum is negative. R eagents (Contains reagents for up to 230 Tests) Volume Equine Infectious Anemia Antigen, preserved with sodium 1 azide (Black Cap). 1 x 3.9 mL Equine Infectious Anemia Positive Control Serum, 2 1 x 11.7 mL preserved with sodium azide (Red Cap). NOTE: See table at the end of the insert for a description of international symbols used on the labels of this kit. Precautions and Warnings 1. Handle all samples and reagents as if capable of transmitting EIAV. 2. Dispose of contents in accordance with local, regional, and national regulations. 3. Do not use kit past expiration date and do not intermix components from kits with different serial numbers. 4. In vitro use only. IDEXX AGID EIA 1 Storage Store the reagents at 2–8°C. Reagents are stable until expiration date, provided they have been stored properly. Specimen Collection and Preparation for Testing Use only horse serum for test specimens. Specimens may be stored at 2–8°C up to five days. If longer storage is desired, store at -20°C. The presence of turbidity, hemolysis or visible indications of bacterial growth may interfere with the performance and accuracy of the test. Do not test specimens that exhibit bacterial growth. Plate Preparation Prepare AGID plates according to the protocols of national and regional animal health authorities. Refer to OIE Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2012, Chapter 2.5.6 – www.oie.int Pattern I Pattern II 3 B 3 B B A 1 B A 1 2 B 2 B Serum and Antigen Placement in Wells (Pattern I) 1. Completely fill the three alternate outside wells (see wells labeled 1, 2 and 3) with each of the three test sera. Avoid any overflow into the agar surface. Alternative patterns may be used where allowed by national or regional animal health authorities. 2. Fill the center well with 50 µL of purified antigen in the same manner (see well “A”). 3. Fill the three remaining outside wells with 50 µL of Positive Control Serum in the same manner (see wells B). 4. Incubate plates for 24–48 hours at 18–26°C in a humid chamber. Weak positive reaction lines may continue to develop for up to 48 hours. 2 IDEXX AGID EIA Results Pattern II shows different precipitin patterns in the AGID test after incubation: 1. Negative serum. Control precipitin lines (B wells) run straight into the negative sample well or bend slightly back towards the B wells (see well 1). 2. Weakly positive serum. Control precipitin lines (B wells) run into the sample well but bend away from the B wells and towards each other (see well 3). 3. Strongly positive serum. A precipitin line forms between the sample well and center well A which is continuous with the control precipitin lines between wells B and A (see well 2). 4. Very strongly positive serum. Control precipitin lines (B wells) bend towards each other before they reach the test serum wells. They may be connected by a broad diffuse precipitin line which will be close to the antigen (A) well. A sharper line can be observed if the serum is two-fold serially diluted and retested. 5. Weak positives may result from: a. Serum taken during the incubation period of EIA. Retesting after two or three weeks may show stronger reaction. b. If the horse continues to show no clinical signs and an unchanged weak positive AGID reaction, then the horse may be considered to be a carrier. c. Weak positives may also be characteristic of nursing foals of infected mares. Retest of the foal after six months should show negative AGID results if the foal is uninfected. If the foal’s mare (dam) is negative in the AGID test then the foal is probably infected. Quality Control If the positive control included in the kit does not react, do not use the kit. Call IDEXX Technical Services. IDEXX AGID EIA 3 IDEXX Technical Services: IDEXX USA Tel: 1 800 548 9997 or 1 207 556 4890 Fax: 1 800 328 5461 or 1 207 556 4826 IDEXX Europe Tel: 00800 727 43399 Fax: 00800 433 99329 U.S. Vet. License No. 313 Product Code 5515.22 *IDEXX and Test With Confidence are trademarks or registered trademarks of IDEXX Laboratories, Inc. or its affiliates in the United States and/or other countries. ©2013 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 4 IDEXX AGID EIA IDEXX AGID EIA Version Française Kit de détection des anticorps dirigés contre le Virus de l’Anémie Infectieuse Equine Réservé à l’usage vétérinaire. Introduction L’antigène purifié du virus de l’anémie infectieuse équine (AIE) peut être utilisé dans une épreuve d’immunodiffusion sur gélose (IDG) pour détecter la présence d’anticorps anti-AIE dans le sérum de chevaux infectés. L’utilisation d’antigènes hautement purifiés du virus de l’AIE élimine pratiquement les arcs de précipitation non spécifiques. Ces arcs peuvent fausser la lecture de l’épreuve. Description La diffusion d’un antigène et d’un anticorps au sein d’une gélose peut entraîner la formation d’arcs de précipitation. Sur la base de ce principe, il a été établi que l’épreuve IDG pouvait détecter avec exactitude les anticorps spécifiques de l’AIE formés de 10 à 30 jours après l’apparition de l’infection. Les arcs de précipitation peuvent être visualisés avec les sérums fortement positifs en continuité avec l’arc formé entre le sérum témoin et le puits d’antigènes central. Les sérums faiblement positifs sont indiqués par une incurvation de l’arc du sérum témoin vers le puits d’antigènes. Aucun arc ne se forme si le sérum est négatif. R éactifs (Contient des réactifs pour un maximum de 230 tests) Volume Antigènes de l’anémie infectieuse équine (inactivé), 1 conservé avec de azoture de sodium (capuchon noir) 1 x 3,9 ml Contrôle positif de l’anémie infectieuse équine, 2 conservé avec de azoture de sodium (capuchon rouge) 1 x 11,7 ml REMARQUE: voir le tableau à la fin du mode d’emploi pour la description des symboles internationaux utilisés sur les étiquettes de la trousse. Précautions d’emploi et mises en garde 1. Considérez tous les échantillons et réactifs comme susceptibles de transmettre le virus de l’AIE. Incinérez ou autoclavez les composants inutilisés. 2. Éliminez le contenu conformément aux réglementations locales, régionales et nationales. 3. Ne pas utiliser les trousse après leur date de péremption et ne pas les mélanger composants avec ceux de trousse ayant un numéro de série différent. 4. Pour diagnostic in vitro seulement. IDEXX AGID EIA 5 Conservation Conservez les réactifs à 2–8°C. Les réactifs sont stables jusqu’à leur date de péremption à condition d’avoir été conservés correctement. Recueil des échantillons et préparation de l’épreuve Utilisez uniquement du sérum de cheval pour les échantillons d’épreuves. Les échantillons peuvent être conservés jusqu’à cinq jours à 2–8°C. Pour un entreposage plus long, conservez-les à une température de –20°C. La présence de turbidité, d’une hémolyse ou de signes visibles de croissance bactérienne peut fausser les performances et l’exactitude de l’épreuve. Ne testez pas d’échantillons présentant une croissance bactérienne. Préparation des géloses Préparer les géloses selon le protocole applicable établi par les autorités véterinaires nationales ou régionales. On peut aussi se référer au Manuel des tests de diagnostic et des vaccins pour les animaux terrestres 2012, Chapitre 2.5.6, www.oie.int. Schéma I Schéma II 3 B 3 B B A 1 B A 1 2 B 2 B Dépôt des sérums et de l’antigène dans les puits (Schéma I) 1. Remplissez complètement trois puits périphériques (puits 1, 2 et 3) avec chacun des trois sérums à tester, en veillant à ne pas déborder sur la gélose. Un schéma de puits différent peut être utilisé lorsque qu’il est requis par les autorités vétérinaires nationales ou régionales. 2. Remplissez de la même manière le puits central avec 50 µl d’antigène purifié (puits “A”). 3. Remplissez les trois puits périphériques restants avec 50 µl de Contrôle positif (puits “B”). 4. Incubez les boîtes pendant 24 à 48 heures à 18–26°C en chambre humide. Si nécessaire (réponse faiblement positive, ligne de précipité du Contrôle positif non complète...), l’incubation peut être poursuivie entre 24 et 48 h. 6 IDEXX AGID EIA Résultats Le schéma II illustre les différents aspects que peuvent présenter les arcs de précipitation dans l’épreuve IDG après incubation: 1. Sérum négatif. Les lignes de précipitation du contrôle positif (puits B) se rendent directement dans le puits d’échantillon négatif ou se recourbent légèrement vers les puits B (puits 1). 2. Sérum faiblement positif. Les lignes de précipitation du contrôle positif (puits B) se rendent dans le puits d’échantillon, mais s’incurvent à l’opposé des puits B et migrent l’une vers l’autre (puits 3). 3. Sérum fortement positif. Il se forme entre le puits d’échantillon et le puits central A un arc continu avec l’arc du contrôle positif entre les puits B et A (puits 2). 4. Sérum très fortement positif. Les lignes de précipitation du contrôle positif (puits B) s’incurvent l’une vers l’autre avant d’atteindre les puits des sérums. Elles peuvent être liées par une bande de précipitation plus large ayant tendance à diffuser, qui sera près du puits d’antigène (A). On peut observer une ligne plus nette après dilution préalable de l’échantillon. 5. Les réactions faiblement positives peuvent résulter de plusieurs facteurs: a. Le sérum a été pris au cours de la période d’incubation de l’AIE. Si vous retestez dans deux ou trois semaines, vous devriez obtenir des réactions plus fortes. b. Si l’animal ne présente toujours pas de signes cliniques et donne à nouveau la même réaction faiblement positive, celui-ci peut être considéré comme porteur AIE. c. Les réactions faiblement positives peuvent aussi s’avérer caractéristiques de jeunes poulains issus de mères infectées. Dans ce cas, il est conseillé de retester le poulain six mois plus tard afin de déterminer si la réaction positive initiale était d’origine maternelle. Si la mère est séronégative, son poulain est probablement infecté. Contrôle de qualité Si le Contrôle positif inclus dans la trousse ne fonctionne pas, n’utilisez pas la trousse. IDEXX AGID EIA 7 Services techniques d’IDEXX: IDEXX USA Tél. 1 800 548 9997 ou 1 207 556 4890 Téléc. 1 800 328 5461 ou 1 207 556 4826 IDEXX Europe Tél. 00800 727 43399 Téléc. 00800 433 99329 Perm. vét. des É.-U. N° 313 Code de produit 5515.22 *IDEXX et Test With Confidence sont des marques de commerce ou des marques déposées d’IDEXX Laboratories, Inc. ou ses filiales aux États-Unis et/ou dans d’autres pays. © 2013 IDEXX Laboratories, Inc. Tous droits réservés. 8 IDEXX AGID EIA