Ministério da Saúde Fundação Oswaldo Cruz Centro de Pesquisas René Rachou Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde Avaliação da infecção por Leishmania spp. em pequenos mamíferos de áreas endêmicas de Minas Gerais, Brasil por Agnes Antônia Sampaio Pereira Belo Horizonte Fevereiro/2015 DISSERTAÇÃO MDIP-CPqRR A.A.S. PEREIRA 2015 Ministério da Saúde Fundação Oswaldo Cruz Centro de Pesquisas René Rachou Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde Avaliação da infecção por Leishmania spp. em pequenos mamíferos de áreas endêmicas de Minas Gerais, Brasil por Agnes Antônia Sampaio Pereira Dissertação apresentada com vistas à obtenção do Título de Mestre em Ciências na área de concentração Doenças Infecciosas e Parasitárias. Orientação: Dra. Célia Maria Ferreira Gontijo Co-orientação: Dr. Eduardo de Castro Ferreira Belo Horizonte Fevereiro/2015 II Catalogação-na-fonte Rede de Bibliotecas da FIOCRUZ Biblioteca do CPqRR Segemar Oliveira Magalhães CRB/6 1975 P436a Pereira, Agnes Antônia Sampaio. 2015 Avaliação da infecção por Leishmania spp. em pequenos mamíferos de áreas endêmicas de Minas Gerais, Brasil / Agnes Antônia Sampaio Pereira. – Belo Horizonte, 2015. XX, 106 f.: il.; 210 x 297mm. Bibliografia: f.: 112 - 126 Dissertação (Mestrado) – Dissertação para obtenção do título de Mestre em Ciências pelo Programa de Pós - Graduação em Ciências da Saúde do Centro de Pesquisas René Rachou. Área de concentração: Doenças Infecciosas e Parasitárias. 1. Leishmaniose/transmissão 2. Leishmania/parasitologia 3. Reservatórios de Doenças/parasitologia I. Título. II. Gontijo, Célia Maria Ferreira (Orientação). III. Ferreira, Eduardo de Castro (Co-orientação). CDD – 22. ed. – 616.936 4 III Ministério da Saúde Fundação Oswaldo Cruz Centro de Pesquisas René Rachou Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde Avaliação da infecção por Leishmania spp. em pequenos mamíferos de áreas endêmicas de Minas Gerais, Brasil por Agnes Antônia Sampaio Pereira Foi avaliada pela banca examinadora composta pelos seguintes membros: Prof. Dra. Célia Maria Ferreira Gontijo (Presidente) Prof. Dr. Edward José de Oliveira Prof. Dr. André Luiz Rodrigues Roque Suplente: Prof. Dr. Daniel Moreira de Avelar Dissertação defendida e aprovada em: 26/02/2015 IV Dedico este trabalho aos meus pais por todo o amor e aos meus orientadores pela infinidade de ensinamentos. “Por vezes sentimos que aquilo que fazemos não é senão uma gota de água no mar. Mas o mar seria menor se lhe faltasse uma gota”. Madre Teresa de Calcutá V Agradeço aos órgãos de fomento: CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, pela concessão da minha bolsa; Às instituições que financiaram este projeto: FAPEMIG, CNPq e FIOCRUZ. À Plataforma de PCR em Tempo Real por ceder a infraestrutura necessária para a realização dos experimentos, em especial a Dra. Fernanda Barbosa Nogueira pela atenção e disponibilidade. VI Agradecimentos Agradeço primeiramente a Deus por sua grandeza e imenso amor. Por me dar forças para seguir e conquistar meus objetivos. Aos meus pais, Antônio e Hélia, por serem a base da minha vida. Por terem se doado para a realização dos meus sonhos, por todos os conselhos, pelo apoio nas dificuldades e por serem as melhoras pessoas que eu conheço. Meu agradecimento a vocês jamais seria traduzido em palavras... À minha avó, Dona Nega, que viveu comigo a felicidade em ser aprovada na seleção para o Mestrado, mas, infelizmente, não está entre nós para ver a conclusão desta etapa. Vovó, nunca vou esquecer o quanto fez por mim durante toda a minha vida. Ao Luiz Otávio, pela compreensão diária, pelo carinho, paciência, por sempre trazer humor para as situações mais difíceis, por me amar, me entender, me confortar e por sempre estar ao meu lado! E claro, à toda a sua família que me acolhe com tanto afeto. Em especial ao Sr. Ermelindo e D. Nana, Dodora, Ana, Pedro, à Ana pela ajuda com o inglês (muito obrigada!) e a todos que me consideram parte dessa família tão importante para mim. A todos os meus familiares e ao Mário, pelo cuidado e dedicação. À minha orientadora Dra. Célia Maria Ferreira Gontijo por me dar a incrível oportunidade e honra de ser sua aluna. Por me ensinar tanto, por não desistir de mim e, principalmente, pela amizade construída com muito carinho e dedicação. De coração, muito obrigada!!! Ao meu co-orientador, Dr. Eduardo de Castro Ferreira, por ter sido muito mais que um orientador, mas um amigo incomparável que está sempre disposto a ajudar, qualquer que seja a situação. Por achar tantas soluções para tantos problemas e pela total dedicação a mim conferida. De sua grande amiga, muito obrigada! VII Aos grandes amigos que tive a felicidade de conhecer no CPqRR: Laura, Tina, Érika, Raquel, Tamara, Mari, Lise, Jucélia, Fabi Lara, Fabi Paixão, Josie, Maiara, Rosana, Jeiza, Gabriel, Aline... Muito obrigada por toda a ajuda e por tornarem meus dias mais felizes! Às queridas amigas que eu fiz no Mestrado: Sarah, Luiza e Raíssa, por todos os momentos, pelo companheirismo, nos sufocos e nas horas mais tranquilas! À Lara e ao Je por todo o apoio e por tantas risadas ao longo desses dois anos, à Gabi e à Thaís pela grande ajuda e pelo suporte emocional na maioria dos dias! À Dra. Patrícia Flávia Quaresma pelo fornecimento das amostras da Terra Indígena Xakriabá e por todo o apoio durante a realização deste trabalho. Ao Dr. Gustavo Fontes Paz pela oportunidade em participar das coletas dos pequenos mamíferos de Casa Branca no Município de Brumadinho. Ao Dr. José Dilermando Andrade Filho e Cristiani de Castilho Sanguinette pelo fornecimento das amostras dos pequenos mamíferos de Várzea da Palma. Novamente ao meu co-orientador, Eduardo de Castro Ferreira, pelo fornecimento das amostras dos animais de Belo Horizonte. Ao Dr. Adriano Pereira Paglia pelo fornecimento das licenças para a coleta dos pequenos mamíferos e pela identificação da espécie dos mesmos. À Dra. Taynãna César Simões, pela grande ajuda com as análises estatísticas. Ao Msc. Felipe Dutra Rêgo pela ajuda na elaboração do mapa e em todas as outras dúvidas de informática. VIII À Fundação Oswaldo Cruz, ao Centro de Pesquisas René Rachou e ao Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde pela oportunidade de desenvolver este projeto e pelo incentivo recebido. À biblioteca do CPqRR por prover acesso gratuito local e remoto à informação técnico-científica em saúde custeada com recursos públicos federais, integrante do rol de referências desta dissertação. A todas as pessoas que estiveram ao meu lado, torceram por mim e me incentivaram durante este período. IX Sumário Lista de figuras .............................................................................................. XIII Lista de tabelas ............................................................................................ XVI Lista de abreviaturas .................................................................................. XVII Resumo ......................................................................................................... XIX Abstract .......................................................................................................... XX 1 Introdução ................................................................................................ 21 1.1 Aspectos gerais das leishmanioses .................................................... 22 1.2 Leishmanioses no Novo Mundo .......................................................... 23 1.3 Leishmanioses em Minas Gerais ........................................................ 25 1.4 Os ciclos de transmissão das leishmanioses e a urbanização ............ 27 1.5 Transmissão vetorial de Leishmania spp. ........................................... 29 1.6 Hospedeiros e reservatórios ............................................................... 30 1.7 A utilização de técnicas moleculares para a detecção e identificação de Leishmania sp. .............................................................................................. 33 1.7.1 Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) ....................................... 33 1.7.2 Polimorfismo de Tamanho dos Fragmentos de Restrição (RFLP) .. 34 1.7.3 Quantificação da carga parasitária pela PCR quantitativa em tempo real (qPCR) ....................................................................................................... 36 2 Justificativa .............................................................................................. 38 3 Objetivos .................................................................................................. 41 3.1 Objetivo Geral ..................................................................................... 42 3.2 Objetivos Específicos .......................................................................... 42 4 Materiais e Métodos ................................................................................ 43 4.1 Área de estudo .................................................................................... 44 4.1.1 Belo Horizonte ................................................................................. 45 4.1.2 Divinópolis ....................................................................................... 45 4.1.3 Brumadinho ..................................................................................... 47 4.1.4 São João das Missões .................................................................... 47 4.1.5 Várzea da Palma ............................................................................. 47 4.2 Captura dos pequenos mamíferos ...................................................... 48 4.2.1 Belo Horizonte (Regional Nordeste) ................................................ 48 4.2.2 Divinópolis ....................................................................................... 50 X