UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM IMUNOLOGIA BÁSICA E APLICADA DETECÇÃO DA HEPATITE B OCULTA EM DOAÇÕES DE SANGUE DAS REGIONAIS DE SAÚDE ALTO SOLIMÕES E AMAZONAS HELAINE DE ARAÚJO VIRGOLINO MANAUS - AMAZONAS 2013 UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM IMUNOLOGIA BÁSICA E APLICADA HELAINE DE ARAÚJO VIRGOLINO DETECÇÃO DA HEPATITE B OCULTA EM DOAÇÕES DE SANGUE DAS REGIONAIS DE SAÚDE ALTO SOLIMÕES E AMAZONAS Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Imunologia Básica e Aplicada da Universidade Federal do Amazonas como parte do pré-requisito apara obtenção do título de Mestre em Imunologia na área de concentração “Imunologia Básica e Aplicada”. Orientadora: Profa Dra. Kátia Luz Torres Silva Co-Orientadora: Profa Dra. Adriana Malheiro Manaus - Amazonas 2013 Ficha Catalográfica Ficha catalográfica elaborada automaticamente de acordo com os dados fornecidos pelo(a) autor(a). Virgolino, Helaine de Araújo V817d Detecção da hepatite B oculta em doações de sangue das regionais de saúde Alto Solimões e Amazonas / Helaine de Araújo Virgolino. 2013 127 f.: il. color; 29.7 cm. Orientadora: Kátia Luz Torres Silva Coorientadora: Adriana Malheiro Dissertação (Mestrado em Imunologia Básica e Aplicada) - Universidade Federal do Amazonas. 1. DNA VHB. 2. hepatite B. 3. doadores de sangue. 4. hepatite b oculta. 5. Amazônia. I. Silva, Kátia Luz Torres II. Universidade Federal do Amazonas III. Título HELAINE DE ARAÚJO VIRGOLINO DETECÇÃO DA HEPATITE B OCULTA EM DOAÇÕES DE SANGUE DAS REGIONAIS DE SAÚDE ALTO SOLIMÕES E AMAZONAS Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Imunologia Básica e Aplicada da Universidade Federal do Amazonas como parte do pré-requisito apara obtenção do título de Mestre em Imunologia na área de concentração “Imunologia Básica e Aplicada”. APROVADA EM:_________________ BANCA EXAMINADORA _______________________________________________ Profa Dra. Kátia Luz Torres Silva, Presidente Universidade Federal do Amazonas _______________________________________________ Profa Dra. Aya Sadahiro, Membro Interno Universidade Federal do Amazonas _______________________________________________ Profa Dra. Norma de Paula Cavalheiro, Membro Externo Universidade de São Paulo ii A Deus, por ser minha fortaleza. Ao meu Pai Aristeu, meu incentivador em todos os momentos. Ao Miranda e Renan pela paciência, amor e compreensão. A minha mãe Joaquina e meus irmãos Eliane, Herivaldo e Kátia por sempre confiarem no meu potencial. Dedico iii Agradecimentos A Profa. Dra. Kátia Luz Torres Silva, pela compreensão, paciência e dedicação com as quais me orientou e pelo exemplo que é para mim de pessoa íntegra, mulher, mãe e profissional, dedicada e humilde. Obrigada pelos ensinamentos e conselhos, fundamentais para o meu aprendizado. A Profa. Dra. Aya Sadahiro por ter acreditado em mim sempre e ter demonstrado isso em todos os momentos desta caminhada. A Márcia Poinho Encarnação de Morais e Christiane Usui, por sempre acreditarem e confiarem em mim e me incentivarem à produção científica. A Mônica Moresco minha companheira de mestrado, pelo apoio incondicional e Isabella Passos a quem tive a grata surpresa de conhecer, conviver e saborear da sua amizade. Ao Dr. José Eduardo Levi e equipe, Dra. Micheli Gomes Gouvêa, Dr. João Pinho, e toda sua equipe pela parceria estabelecida e fornecimento de tecnologia para a realização deste estudo. Aos Professores da Pós-Graduação em Imunologia Básica e Aplicada (PPGIBA), pela dedicação, todos representados na pessoa da Profa. Dra. Adriana Malheiro. A Profa. Dra. Maria Cristina dos Santos, que incentivou a todos nós no início desta jornada. A equipe do Programa de Pós Graduação em Imunologia Básica e Aplicada, Meg e Ricardo sempre dispostos a ajudar. A Fundação Hospitalar de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas (HEMOAM), especialmente a equipe técnica da sorologia e setor do interior representado por Cynara, Elcy e Neide, por ajudarem na obtenção das amostras coletadas. A Lya e Kelly alunas do Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica (PIBIC), que nos ajudaram muito coletando os dados do projeto. A Equipe técnica da Fundação Alfredo da Matta na pessoa do André Leturiondo por ceder o espaço da Biologia Molecular para a realização de parte da nossa pesquisa. A Empresa Diagnocel que doou os kits anti-HBc e anti-HBs para a realização do estudo. iv A Secretaria Municipal de Saúde de Manaus (SEMSA) que permitiu a realização de parte dos exames nas dependências do Laboratório Profo. Manoel Bastos Lira. A equipe da Gerência de Apoio Diagnóstico da Secretaria Municipal de Saúde, pela compreensão, força, incentivo e ajuda nas horas em que precisei. Um especial agradecimento a todos os doadores de sangue que participaram do estudo e aos técnicos das Unidades de Coleta Transfusionais dos interiores, pois sem a colaboração deles o trabalho não teria sido possível. Aos amigos do mestrado Andréa Tarragô, Allyson Guimarães, Edilene Martins, Luciana Souza, Paula Taquita, Juliana Lameiras pessoas fundamentais nesta caminhada. Aos meus amores e parceiros na vida José Miranda e Renan que souberam entender esse período turbulento e me apoiaram em todos os momentos. Ao meu Tio Zezinho, Dona Nana, Vera e Dona Dejanira pessoas que foram presentes e apoiaram a minha família nos momentos mais difíceis. A minha Família que no ano de 2012 viveu um momento especial, fomos surpreendidos pela ida do nosso líder maior a casa do Pai, e mesmo assim não deixamos a peteca cair. Ao grupo de amigos e irmãos "Os Excluídos" que sempre estiveram ao meu lado, dando força, chorando, rindo, orando e trocando experiências de vida. As minhas amigas de sempre Dora, Etelvina, Helen, Adriana, Régia e Solange, por compartilharem todos os momentos ao longo destes dois anos e sempre torceram por mim. Ao grupo do Encontro de Casais com Cristo (ECC) pela fé e oração e a Deus que me fez renascer das cinzas. v “... meu Deus, eu confio em ti!...” Salmos 9:2 vi RESUMO A infecção causada pelo vírus da hepatite B (VHB) tem uma distribuição mundial e representa um importante problema de saúde pública. A hepatite B ainda configura um risco na terapia transfusional tendo em vista o potencial de transmissão parenteral. Na triagem sorológica para o VHB são utilizados marcadores que detectam o antígeno de superfície do vírus (HBsAg) e o anticorpo contra o antígeno do core (anti-HBc). A hepatite B oculta (caracterizada pela presença de DNA do VHB, em amostras HBsAg negativas), tem sido um desafio na triagem sorológica de doadores de sangue do interior do Estado do Amazonas onde existem mais de 22% de doações reativas para o marcador anti-HBc de forma isolada. Além disso, estudos conclusivos sobre a frequência da hepatite B oculta são escassos no Estado do Amazonas. Sendo a região de alta prevalência da infecção do VHB, faz-se necessária a investigação da frequência da hepatite B oculta. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a presença da hepatite B oculta em amostras anti-HBc positivas com ou sem a presença do marcador anti-HBs na triagem sorológica de doadores de sangue oriundo das Unidades de Coletas Transfusionais (UCT’s) nas regionais de saúde do Alto Solimões e Amazonas, no período de junho/2011 a junho/2012. Foram utilizados métodos sorológicos qualitativos e quantitativos dos marcadores para a infecção e moleculares para detecção, quantificação da carga viral e genotipagem do VHB. A prevalência do anti-HBc total reativo no interior do Estado do Amazonas entre os doadores de sangue foi de 22, 19 %. Foram analisadas 112 amostras anti-HBc reativas e HBsAg negativas, destas, 04 foram positivas para o DNA-VHB. A maior frequência dos doadores de sangue com sorologia reativa para hepatite B oriundos das regionais Alto Solimões e Amazonas apresentam o perfil sorológico anti-HBc e anti-HBs reativos e não são doadores de primeira vez. A prevalência de heptatite B oculta encontrada em doadores oriundos das regionais de saúde Alto Solimões e Amazonas foi de 3,57%. A presença do marcador anti-HBs em títulos elevados (acima de 100 mUI/ml) não foi associada à ausência da hepatite B oculta em doadores de sangue das regionais de saúde Alto Solimões e Amazonas. Não houve associação entre a carga viral encontrada e o perfil sorológico para hepatite B dos doadores de sangue DNA VHB positivos. Não foi possível descrever os genótipos das amostras positivas para o DNA VHB. O risco da IOB pode ser comprovado nos Países onde a técnica de detecção de ácido nucleico (NAT) foi implantada e também através dos resultados deste estudo. A ocorrência de infecção oculta pelo vírus da hepatite B leva ao questionamento do algorítimo atualmente estabelecido para triagem de doadores de sangue na região Amazônica. Seria possível também estabelecer novas estratégias para contemplar segurança transfusional, escassez de sangue no interior do estado e grande descarte de hemocomponentes. Palavras-chave: DNA VHB; hepatite B; doadores de sangue; hepatite B oculta, Amazônia. vii ABSTRACT The infection caused by the hepatitis B virus (HBV) has a worldwide distribution and represents a major public health problem. Hepatitis B also sets a risk in transfusion therapy given the potential transmission parenterally. In serological screening for HBV markers are used to detect the virus surface antigen (HBsAg) and antibody to the core antigen (anti-HBc). The occult hepatitis B (characterized by the presence of HBV DNA in HBsAg negative samples), has been a challenge for serological screening of blood donors in the state of Amazonas where there are more than 22% of donations reactive for anti-marker HBc in isolation. Moreover, conclusive studies on the frequency of occult hepatitis B are scarce in the state of Amazonas. As the area of high prevalence of HBV infection, it is necessary to investigate the frequency of hepatitis B hidden. In this context, the present study aimed to evaluate the presence of hepatitis B hidden in samples anti-HBc positive with or without the presence of the marker anti-HBs in serological screening of donor blood from Units collections Transfusion (UCT's) in regional health Alto Solimoes and Amazonas, from June/2011 to June/2012. We used qualitative and quantitative methods of serological markers for infection and molecular detection, quantification of viral load and genotyping of HBV. The prevalence of anti-HBc reactive within the State of Amazonas among blood donors was 22, 19%. We analyzed 112 samples reactive anti-HBc and HBsAg negative, of these, 04 were positive for HBV DNA. The higher frequency of blood donors with reactive serology for hepatitis B from the regional Alto Solimoes and Amazonas have the serological profile anti- HBc and anti-HBs reactive and are not first-time donors. The prevalence of occult heptatite B in donors from the regional health Alto Solimoes and Amazonas are 3.57%. The presence of the marker in anti-HBs titers (above 100 mIU / ml) is not associated with the absence of occult hepatitis B in blood donors of the regional health Alto Solimoes and Amazonas. No association was found between viral load and hepatitis B serologic profile of blood donors HBV DNA positive. Could not describe the genotypes of samples positive for HBV DNA. The risk of occult infection with hepatitis B virus (OIB) is real and can be seen in countries where the technique was implemented and also through the data of this study. The occurrence of OIB in blood donors in the Amazon region leads to the questioning of the algorithm currently obeyed. You can also establish new strategies to contemplate transfusion safety, blood needs in the state and dispose of blood products. Keywords: HBV DNA, hepatitis B, blood donors, hepatitis B hidden Amazon. viii