UNIVERSITÉ DE REIMS CHAMPAGNE-ARDENNE ÉCOLE DOCTORALE SCIENCES TECHNOLOGIE SANTE (547) THÈSE Pour obtenir le grade de DOCTEUR DE L’UNIVERSITÉ DE REIMS CHAMPAGNE-ARDENNE Discipline : ASPECTS MOLÉCULAIRES ET CELLULAIRES DE LA BIOLOGIE Présentée et soutenue publiquement par Céline MOURAREAU Le 9 décembre 2016 ÉTUDE DE BIOMARQUEURS DE PROGRESSION TUMORALE DANS LES CANCERS DES VOIES AÉRODIGESTIVES SUPÉRIEURES EN FONCTION DE LEUR STATUT HPV Thèse dirigée par Christine CLAVEL JURY M. Philippe BIREMBAUT, , Professeur – Praticien Hosp, à l’Université Reims Champagne-Ardenne, , Président M. Alain JUNG, , Docteur, Centre Anticancéreux Paul Strauss, Stras, , Rapporteur M. Jean-Luc PRETET, , Professeur, à l’Université de Besançon Franche Comté, , Rapporteur Mme. Christine CLAVEL, , Professeur – Praticien Hosp, à l’Université Reims Champagne-Ardenne, , Examinateur M. Marc MAKEIEFF, , Professeur – Praticien Hosp, à l’Université Reims Champagne-Ardenne, , Examinateur M. Patrick SOUSSAN, , Maître de Conférences, Hôpital Tenon, Paris, , Examinateur Remerciements Ce travail a été réalisé au sein de l’unité INSERM UMR-S 903 de Reims, dirigée par le Professeur Philippe Birembaut, puis par le Professeur Myriam Polette. Je les remercie sincèrement tous deux de m’avoir accueillie pendant ces trois années au sein de l’unité. Je suis en particulier reconnaissante au Professeur Philippe Birembaut d’avoir accepté de faire partie du jury d’évaluation de ce travail. Je remercie le Professeur Jean-Luc Prétet responsable de l’EA 3181 à Besançon, d’avoir accepté de participer en tant que rapporteur à l’évaluation de ma thèse. Je remercie le Docteur Alain Jung du laboratoire de biologie tumorale du CLCC Paul Strauss de Strasbourg, d’avoir accepté de participer en tant que rapporteur à l’évaluation de ce travail. Je remercie le Professeur Marc Makeieff, chef du service O.R.L. et chirugie Cervico- Faciale au CHU de Reims et le Docteur Patrick Soussan, du département de virologie de l’hôpital Tenon de Paris et de l’unité INSERM U845, d’avoir accepté de participer au jury d’évaluation de ce travail en tant qu’examinateurs. D’autre part je voudrais évidemment remercier chaleureusement le Professeur Christine Clavel-Cravoisier ainsi que le Docteur Véronique Dalstein qui ont encadré ce travail de thèse. C’est en grande partie grâce à leur aide et conseils inestimables que j’ai pu réaliser cet ouvrage et je leur suis particulièrement reconnaissante pour tout le temps qu’elles m’ont consacré. Je tiens à saluer leur capacité à toujours m’apporter un point de vue favorable dans les moments difficiles. Je tiens également à remercier le Docteur Béatrice Nawrocki-Raby pour son aide précieuse et ses conseils avisés tout au long de ces années. De même je voudrais remercier les Docteurs Camille Boulagnon-Rombi et Jean-Claude Mérol ainsi que Charles Villerabel pour le temps qu’ils ont consacré à l’étude sur la cohorte de carcinomes oropharyngés. Je tiens par la même occasion à remercier toutes les personnes ayant contribué à la réalisation de ce projet et notamment tout le personnel du laboratoire central d’Anatomie et Cytologie Pathologiques, en particulier Marie Tenet, Caroline Fichel et Nicole Bouland. Je tiens à remercier Sébastien Barradeau et Fanny Lemée de la société Genomic Vision pour leur accueil à Bagneux et l’aide qu’ils m’ont apportée dans l’analyse des résultats de peignage moléculaire. Je remercie également Stéphanie Bouchilloux, Djamila El Mhali et Jennifer Abscheidt pour leur aide et leurs conseils. De nombreuses expériences présentées ici n’auraient jamais pu être réalisées sans l’aide scientifique et technique des différents membres de l’unité INSERM UMR-S 903. Je tiens à remercier le Docteur Céline Charlier et Adeline Germain. Je suis également reconnaissante aux docteurs Christelle Coraux, Jean-Marie Tournier, Emilie Luczka, Jérôme Cutrona et Antoine Jonquet pour les conseils qu’ils m’ont apportés. J’exprime mes sincères remerciements au docteur Arnaud Bonnomet pour son aide en imagerie. Je voudrais aussi tout particulièrement remercier Claire Kileztky et Eymeric Lagonotte, pour leur contribution technique et « logistique » à la réalisation de mes expériences. Bien sûr, je n’oublie pas l’aide administrative précieuse d’Annie Chaveriat, je voudrais souligner tout spécialement sa gentillesse et sa bonne humeur. Je tiens bien sûr à remercier la ville de Reims pour son aide financière tout au long de ma thèse. Ces années passées à l’unité n’auraient jamais été les mêmes sans le soutien et la bonne humeur de tous les étudiants (et non étudiants) que j’ai eu la chance de côtoyer au cours de cette thèse. Je voudrais donc remercier les docteurs Simon Grelet, Damien Adam et Julien Lesage qui m’ont précédée, accueillie et fait découvrir l’unité. Je voudrais exprimer toute ma sympathie aux étudiants qui me suivent, Julie Routhier, Déborah Neyrinck, Elodie Serbiné et Jordan Da Silva. Je n’oublie évidemment pas le Docteur Ahlem Boussenna et Emilie Cailliez. J’ai une pensée toute particulière pour « les plus bo du labo », Philippe Noël la touche masculine indispensable, Anaïs Navarre pour avoir partagé toutes nos galères et Amina Jouida qui a été d’un réel soutien lors de mon arrivée sur Reims. Sans vous, ces trois années auraient été bien tristes, je n’oublie pas les chips, flipping table et autres carabistouilles qui nous ont permis de tenir le coup. Je remercie sincèrement mes amies Laurie, Marine, Sophie, Géraldine, Emilie, Axelle, Elsa et Muriel, du nord ou du sud qui m’ont toujours encouragée, je suis ravie de les avoir à mes côtés. Enfin, je voudrais évidemment remercier ma famille et en particulier mes parents, ma sœur et mes grands-parents, qui ont toujours cru en moi et qui m’ont soutenue durant toutes ces années, quels que soient les choix que j’ai fait. Je remercie également Jiss pour être derrière moi, me supporter particulièrement dans les moments difficiles et trouver les mots pour me faire avancer. J’ai une pensée particulièrement émue pour mon grand-père Gabriel. J’espère que d’où tu es, tu es fier de moi. Résumé Étude de biomarqueurs de progression tumorale dans les cancers des voies aéro- digestives supérieures en fonction de leur statut HPV Chaque année 610 000 cancers sont diagnostiqués dans le monde induits par une infection à papillomavirus humains à haut-risque (HPV-HR). Bien que les carcinomes des voies aéro-digestives supérieures (VADS) soient principalement associés à une forte consommation de tabac et d’alcool, 20 à 25% sont causés par une infection à HPV, particulièrement l’HPV de type 16. Les patients HPV positifs présentent une meilleure survie globale, pourtant ils sont diagnostiqués avec plus de métastases à distance que les patients HPV négatifs. Au travers d’une étude sur des lignées cellulaires dérivées des VADS, nous avons montré que toutes les lignées cellulaires HPV+ présentaient une intégration du génome d’HPV au sein du génome cellulaire, avec des profils d’intégration différents. Les lignées pouvant être utilisées comme modèles caractéristiques des tumeurs HPV+ et HPV- sont respectivement les lignées UPCI:SCC090 et FaDu. La première par ses capacités migratoire et proliférative et la seconde par sa faible agressivité et une mutation du gène cellulaire p53. Dans une étude portant sur une série rétrospective de cancers de l’oropharynx éligible à une résection chirurgicale, 6 cancers sur 40 soit 15% présentaient une infection à HPV16 active (expression de l’ARNm E6*I). Nous avons étudié les marqueurs de TEM dans ces cancers oropharyngés en fonction du statut HPV. Nous avons retrouvé une perte plus importante du marqueur épithélial cadhérine-E au sein du groupe HPV+, associée à une moins bonne survie globale. Au total, nous montrons que le statut HPV et les marqueurs de TEM semblent être deux facteurs indépendants, qui peuvent se combiner pour définir des niveaux pronostiques différents. Mots clés : Carcinome, Oropharynx, Papillomavirus Humain, Transition Epithélio- Mésenchymateuse