0 UNIVERSIDADE DO ESTADO DE SANTA CATARINA - UDESC CENTRO DE CIÊNCIAS AGROVETERINÁRIAS - CAV MESTRADO EM CIÊNCIA ANIMAL FERNANDA DANIELLE MELO AVALIAÇÃO DA INOCUIDADE E QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DO QUEIJO ARTESANAL SERRANO E SUA RELAÇÃO COM O PERÍODO DE MATURAÇÃO LAGES, SC 2013 1 FERNANDA DANIELLE MELO AVALIAÇÃO DA INOCUIDADE E QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DO QUEIJO ARTESANAL SERRANO E SUA RELAÇÃO COM O PERÍODO DE MATURAÇÃO. Dissertação apresentada ao Centro de Ciências Agroveterinárias da Universidade do Estado de Santa Catarina no Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, como parte dos requisitos para obtenção do título de Mestre em Ciência Animal. Orientadora: Profa. Dra. Sandra Maria Ferraz. Co-orientador: Profa. Dra. Eliana Knackfuss Vaz. LAGES, SC 2013 2 Ficha catalográfica elaborada pela Bibliotecária Renata Weingärtner Rosa – CRB 228/14ª Região (Biblioteca Setorial do CAV/UDESC) Melo, Fernanda Danielle Avaliação da inocuidade e qualidade microbiológica do queijo artesanal serrano e sua relação com o período de maturação. / Fernanda Danielle Melo; orientadora: Sandra Maria Ferraz. – Lages, 2013. 46f. Inclui referências. Dissertação (mestrado) – Centro de Ciências Agroveterinárias / UDESC. 1. Listeria monocytogenes. 2. Salmonella sp. 3. Staphylococccus aureus. 4. Coliformes totais. 5. Escherichia coli. I. Título. CDD – 637.3 3 FERNANDA DANIELLE MELO AVALIAÇÃO DA INOCUIDADE E QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DO QUEIJO ARTESANAL SERRANO E SUA RELAÇÃO COM O PERÍODO DE MATURAÇÃO. Dissertação apresentada ao Centro de Ciências Agroveterinárias da Universidade do Estado de Santa Catarina no Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, como requisito para obtenção do título de Mestre em Ciência Animal. Banca Examinadora Orientadora: ___________________________________ Professora Dra. Sandra Maria Ferraz Universidade do Estado de Santa Catarina - UDESC. Membro: ___________________________________ Professora Dra. Eliana Knackfuss Vaz Universidade do Estado de Santa Catarina - UDESC. Membro: ___________________________________ Professora Dra. Andrea Troller Pinto Universidade Federal do Rio Grande do Sul – UFRGS. Lages, 22 de fevereiro de 2013. 4 AGRADECIMENTOS Agradeço a Deus por todas as oportunidades em minha vida. A minha família meus pais Maria e João Melo e meus irmãos Renata e Anderson Melo pelo amor, incentivo e apoio em todos os momentos. A profa. Sandra Maria Ferraz pela orientação, confiança e amizade durante o mestrado. A profa Eliana K. Vaz pela atenção e amizade e ao prof. André Thaler pelo apoio e dedicação fundamentais ao trabalho. Aos meus colegas de mestrado Alais Dall Agnol, Márcio V. Ramella, Dayane Dambrós, Claudia Pies, Franciane Batista, Tatiane S. Martins, Sheyla M. Rodakiewicz e Camila Y. Lenoch por toda colaboração ao trabalho. A todos os integrantes do laboratório CEDIMA em especial ao prof. Ubirajara, Fabiana Forell, Marcella N. Pereira, Sandro Jorge, Caroline Martini, Sara Zarth, Paula Wildelmann, Gabriele Ramos e Stéfano Caon por toda a ajuda imprescindível para realização do projeto. A Caroline Pissetti por todo auxílio e paciência que teve comigo e a Karine A. Dalmina sempre disposta a ajudar independente do dia ou hora. Ao prof. Gilberto M. Ide pela confiança em mim e a toda equipe da EPAGRI pelo auxílio nas coletas. Enfim, a todos os meus amigos sempre presentes em especial a Zenita Eineck, Marilene Velho, Viviane F. Velho e Lúcia H. Baggio por todo carinho e incentivo dedicados a mim. 5 RESUMO MELO, Fernanda Danielle. Avaliação da Inocuidade e Qualidade Microbiológica do Queijo Artesanal Serrano e sua Relação com o Período de Maturação. 2013. 46 f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) - Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Lages, 2013. O queijo artesanal serrano de Santa Catarina é um produto típico produzido em pequenas propriedades rurais na Serrana Catarinense. Sua principal característica é ser fabricado a partir do leite cru, sem sofrer nenhum tratamento térmico que elimine os microrganismos patogênicos que podem estar presente. Este fato traz grandes implicações, principalmente, para saúde pública pelo risco desse produto causar doenças transmitidas por alimentos. A legislação vigente permite que queijos artesanais elaborados a partir de leite cru sejam maturados por um período inferior a 60 dias, porém, declara a necessidade de estudos técnico-científicos a fim de comprovarem a melhor época de maturação, para que se possa garantir a qualidade e a inocuidade do produto. O presente estudo teve por objetivo realizar o isolamento e a identificação de Listeria monocytogenes e Salmonella sp. e o isolamento e quantificação de Staphylococcus aureus, Escherichia coli e coliformes totais e relacionar o tempo de maturação com a contaminação dos queijos artesanais, verificando assim, a melhor época de maturação para comercializar um produto que seja seguro ao consumidor. O experimento foi conduzido utilizando 108 amostras de queijo artesanais serranos provenientes de várias cidades da Região Serrana de SC, com períodos de maturação entre 14, 28, 42 e 63 dias. No Centro de Diagnóstico Microbiológico Animal - CEDIMA foram realizadas as seguintes análises: pesquisa de Listeria monocytogenes segundo o método USDA/2009 e isolamento de Salmonella sp. segundo a metodologia ISO 6579/2007. As bactérias identificadas como Listeria monocytogenes foram enviadas para sorotipificação na Fundação Instituto Oswaldo Cruz. A contagem de Staphylococcus aureus, Coliformes Totais e Escherichia coli foi realizada em placas de petrifilm™. A qualidade higiênico- sanitária dos queijos analisados foi insatisfatória, pois a presença de Staphylococcus aureus, Escherichia coli e coliformes totais encontrou-se acima dos valores permitidos pela legislação, indicando deficiência nos procedimentos de higiene durante a fabricação do produto. A Salmonella sp. não detectada em nenhuma das amostras, porém, a presença de Listeria monocytogenes torna o queijo impróprio para o consumo humano, uma vez que oferece risco potencial a saúde do consumidor. O período até 60 dias maturação não influenciou estatisticamente no isolamento dos microrganismos analisados. Palavras chave: Listeria monocytogenes. Salmonella sp.. Staphylococccus aureus. Coliformes Totais. Escherichia coli. 6 ABSTRACT MELO, Fernanda Danielle. Assessment of Microbiological Safety and Quality of handmade Cheese Serrano and its Relation to the Ripening Period. 2013. 46 f. Dissertation (MSc in Animal Science) - University of the State of Santa Catarina. Postgraduate Program in Animal Science, Lages, 2013. The handmade serrano cheese of Santa Catarina is a typical product made on small farms in the Serrana Region Catarinense. Its main feature is to be manufactured from raw milk without suffering any heat treatment in order to eliminate pathogenic microorganisms that may be present. This fact has major implications, especially for the public health risk that product cause foodborne illness. Current law allows handmade cheeses from raw milk to be aged for a period less than 60 days, however, but also declares the need for technical-scientific studies to prove the best time of maturation, to ensure the quality and safety of the product. The present study aimed to realize the isolation and identification of Listeria monocytogenes and Salmonella sp. and isolating and quantifying Staphylococcus aureus, Escherichia coli and total coliforms and relate the maturation time with contamination of handmade cheeses, thus verifying the best time of maturation to make a product that is safe for consumers. The experiment was conducted using 108 samples of handmade serranos cheese from various cities in the mountainous region of SC, with maturity periods of between 14, 28, 42 and 63 days. In Animal Microbiological Diagnostic Center - CEDIMA were performed the following analyzes: isolation of Listeria monocytogenes using the method USDA/2009 and of Salmonella sp. methodology according to ISO 6579/2007. The bacteria identified as Listeria monocytogenes were sent for serotyping the Instituto Oswaldo Cruz Foundation. The enumeration of Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Total Coliform was performed on petrifilm™ plates. The sanitary quality of the cheeses analyzed was unsatisfactory, because the presence of Staphylococcus aureus, Escherichia coli and total coliform was found above the levels permitted by law, indicating deficiency in hygiene procedures during manufacture of the product. Salmonella sp. not detected in any sample, but, the presence of Listeria monocytogenes makes cheese unfit for human consumption, as it offers potential risk to consumer health .The maturing period up to 60 days did not affect the isolation of the microorganisms statistically analyzed. Keywords: Listeria monocytogenes. Salmonella sp.. Staphylococcus aureus. Escherichia coli. Total Coliform. 7 LISTA DE TABELAS Tabela 1. Frequência de isolamento e quantificação de Coliformes Totais e Escherichia coli de queijos artesanais produzidos na região serrana de Santa Catarina. .................................................................................................................... 36 Tabela 2. Frequência de isolamento e quantificação de Coliformes Totais, Escherichia coli e Staphylococcus aureus acima de 103 UFC/25g de queijos artesanais produzidos na região serrana de Santa Catarina..................................... 37 Tabela 3. Frequência de isolamento e identificação de Salmonella sp., Listeria sp. e Listeria monocytogenes de queijos artesanais produzidos na região serrana de Santa Catarina. ......................................................................................................... 39 Tabela 4. Resultados médios dos parâmetros físico-químicos de queijos artesanais produzidos na região serrana de Santa Catarina. ..................................................... 42 8 SUMÁRIO 1 INTRODUÇÃO ......................................................................................................... 9 2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA.............................................................................. 11 2.1.1 Maturação do Queijo Artesanal Serrano .................................................... 13 2.2 Segurança Alimentar ........................................................................................ 14 2.2.1 Microrganismos indicadores ...................................................................... 16 2.2.1.1 Coliformes totais .................................................................................. 16 2.2.1.2 Escherichia coli .................................................................................... 17 2.2.2 Staphylococcus aureus (S. aureus) ........................................................... 18 2.2.3 Salmonella sp. ........................................................................................... 20 2.2.4 Listeria monocytogenes ............................................................................. 21 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................... 24 AVALIAÇÃO DA INOCUIDADE E QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DO QUEIJO ARTESANAL SERRANO E SUA RELAÇÃO COM O PERÍODO DE MATURAÇÃO .................................................................................................................................. 31 RESUMO ............................................................................................................... 31 ABSTRACT ........................................................................................................... 32 INTRODUÇÃO ....................................................................................................... 33 MATERIAL E MÉTODOS ...................................................................................... 34 RESULTADOS E DISCUSSÃO ............................................................................. 36 CONCLUSÕES ...................................................................................................... 43 AGRADECIMENTOS ................................................................................................ 49 APÊNDICE ................................................................................................................ 50 9 1 INTRODUÇÃO A região serrana de Santa Catarina é reconhecida por possuir clima, vegetação, altitude, costumes e tradição peculiares, o que a diferencia das demais regiões do estado. Devido a essas heterogeneidades existem alguns produtos típicos demarcados pelas características da região. Dentre estes produtos, o queijo artesanal serrano é produzido tradicionalmente em muitas propriedades da região. O queijo artesanal serrano é um produto típico, produzido com leite cru, obtido da ordenha de vacas de raças de corte ou mista, alimentadas pricipalmente com pastagem nativa, resultando em um leite com maior percentual de gordura, fatores estes, que o diferencia de outros queijos produzidos artesanalmente. Sua produção é de grande impacto econômico, por ser indispensável para a composição da renda de muitos produtores que tem nessa atividade sua principal fonte de sobrevivência. Embora seja um produto muito difundido na região e altamente apreciado pelos consumidores, o queijo artesanal serrano é fabricado e comercializado as margens da legislação, tal fato explica a falta de informações sobre a qualidade e inocuidade do produto. A principal característica do queijo artesanal serrano é ser produzido a partir do leite cru, sem sofrer nenhum tratamento térmico que elimine os microrganismos patogênicos que possam estar presentes. Sendo assim, a única forma de eliminação ou diminuição até níveis permitidos pela legislação destes agentes patogênicos é através do processo de maturação. A maturação consiste em processos físicos, químicos e microbiológicos que desfavorecem o desenvolvimento de bactérias patogênicas, porém durante esse processo devem-se obedecer as boas práticas de fabricação e o prazo mínimo de maturação necessário. A legislação vigente permite que a maturação de queijos elaborados a partir de leite cru seja inferior a 60 dias. No entanto, destaca a necessidade de estudos técnico-científicos a fim de comprovarem a melhor época de maturação, para que se possa garantir a qualidadedo produto. Produtos artesanais podem conter microrganismos de origens diversas (ambiente, matéria-prima, manipulador), alguns de grande relevância para saúde pública pela capacidade de causar toxinfecções alimentares a exemplo, Escherichia