UNIVERSIDAD ESTATAL PENÍNSULA DE SANTA ELENA FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS ESCUELA DE AGROPECUARIA “CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE 54 ACCESIONES DE GUANÁBANA (Annona muricata L.) Y 60 DE MANGO (Mangifera indica L.) A TRAVÉS DE MARCADORES GENÉTICOS MOLECULARES DE LAS COLECCIONES DEL BANCO DE GERMOPLASMA DEL INIAP” TRABAJO DE GRADUACIÓN Previo a la obtención del Título de: INGENIERA AGROPECUARIA ARMAS MORENO MÓNICA ISABEL LA LIBERTAD – ECUADOR 2013 UNIVERSIDAD ESTATAL PENÍNSULA DE SANTA ELENA FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS ESCUELA DE AGROPECUARIA “CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE 54 ACCESIONES DE GUANÁBANA (Annona muricata L.) Y 60 DE MANGO (Mangifera indica L.) A TRAVÉS DE MARCADORES GENÉTICOS MOLECULARES DE LAS COLECCIONES DEL BANCO DE GERMOPLASMA DEL INIAP” TRABAJO DE GRADUACIÓN Previo a la obtención del Título de: INGENIERA AGROPECUARIA ARMAS MORENO MÓNICA ISABEL LA LIBERTAD – ECUADOR 2013 TRIBUNAL DE GRADO ______________________________ _______________________________ Ing. Antonio Mora Alcívar, MSc. Ing. Andrés Drouet Candell, Msc. DECANO DE LA FACULTAD DIRECTOR DE ESCUELA _______________________________ _______________________________ Blgo. Javier Soto Valenzuela Ing. Clotilde Andrade V, MSc. PROFESOR TUTOR PROFESORA DEL ÁREA _______________________________________ Ab. Milton Zambrano Coronado, MSc. SECRETARIO GENERAL-PROCURADOR CERTIFICACIÓN Los suscritos certifican: Que el trabajo titulado, “CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE 54 ACCESIONES DE GUANÁBANA (Annona muricata L.) Y 60 DE MANGO (Mangifera indica L.) A TRAVÉS DE MARCADORES GENÉTICOS MOLECULARES DE LAS COLECCIONES DEL BANCO DE GERMOPLASMA DEL INIAP”, realizado por la egresada Mónica Isabel Armas Moreno ha sido guiado y revisado periódicamente y cumple normas estatutarias establecidas por la Universidad Estatal Península de Santa Elena como lo indica el Reglamento del Trabajo de Titulación o Graduación de la Universidad. Debido a que este estudio es parte de las investigaciones realizadas por el Instituto Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias – INIAP y financiado por el PROYECTO 2100527024 “Plan e Investigación para seguridad alimentaria- Biotecnología”, se deja en libertad de la autora y del INIAP, para su publicación. El mencionado trabajo consta de un documento empastado y un disco compacto el cual contiene los archivos en formato portátil de Acrobat (PDF). Se autoriza a Mónica Isabel Armas Moreno que lo entregue al Ing. Andrés Drouet Candell, en su calidad de Coordinador de la Carrera. La Libertad, 12 de Julio del 2012 _______________________________ _________________________________ Ing. Andrés Drouet Candell Dr. Eduardo Morillo V. DIRECTOR DE LA CARRERA CO-DIRECTOR (INIAP) DECLARACIÓN DE RESPONSABILIDAD Yo, MÓNICA ISABEL ARMAS MORENO Declaro que: El proyecto de grado denominado “CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE 54 ACCESIONES DE GUANÁBANA (Annona muricata L.) Y 60 DE MANGO (Mangifera indica L.) A TRAVÉS DE MARCADORES GENÉTICOS MOLECULARES DE LAS COLECCIONES DEL BANCO DE GERMOPLASMA DEL INIAP”, ha sido desarrollado con base a una investigación exhaustiva, respetando derecho intelectuales de terceros, conforme las citas que constan al pie de las páginas correspondientes, cuyas fuentes se incorporan en la bibliografía. Consecuentemente este trabajo es de mí autoría. En virtud de esta declaración, me responsabilizo del contenido, veracidad y alcance científico del proyecto de grado en mención. La Libertad, 12 Julio del 2012. _______________________________________ Mónica Isabel Armas Moreno AUTORIZACIÓN Yo, MÓNICA ISABEL ARMAS MORENO Autorizo a la Universidad Estatal Península de Santa Elena la publicación, en la biblioteca virtual de la Institución de la tesis de grado titulada “CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE 54 ACCESIONES DE GUANÁBANA (Annona muricata L.) Y 60 DE MANGO (Mangifera indica L.) A TRAVÉS DE MARCADORES GENÉTICOS MOLECULARES DE LAS COLECCIONES DEL BANCO DE GERMOPLASMA DEL INIAP”, cuya contenido, ideas y criterios son de exclusiva responsabilidad y autoría. La Libertad, 12 de Julio del 2012. _________________________________________ Mónica Isabel Armas Moreno DEDICATORIA Dedico este trabajo a Dios, quien con su inmenso amor me brindó la fortaleza necesaria para seguir adelante y no ceder en el camino. A mi familia, especialmente a mis padres César y Graciela, quienes incansablemente estuvieron a mi lado brindándome su apoyo incondicional, consejos y amor; por verme alcanzar una de mis metas propuestas. Fueron ellos el pilar fundamental para que yo pudiera alcanzar con éxito este propósito. A mi hijo Franco, quien durante el tiempo de elaboración de este trabajo supo esperar pacientemente y me motivó siempre. A Roberto Bracamonte F., quien me impulsó a tomar la decisión de avanzar en mi lucha constante de superación. MÓNICA AGRADECIMIENTOS Al equipo profesional de trabajo del Proyecto Fortalecimiento Biotecnología, mediante el Departamento de Biotecnología de la Estaciones Experimentales Litoral Sur y Santa Catalina del Instituto Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias, por permitirme participar en la formulación y desarrollo de la Tesis de grado. Al Dr. Walter Reyes Borja; por su confianza, por acceder a desarrollarme dentro de su selecto equipo de trabajo al cual en su conjunto, también ofrezco mi sincero agradecimiento. Al Dr. Eduardo Morillo V. por ofrecerme su apoyo incondicional en el desarrollo de la parte experimental, además de darme la oportunidad de incrementar mi conocimiento en el exigente campo del desarrollo de la agricultura; estaré siempre agradecida por sus sabios consejos que son parte de esta tesis. A la Ing. Gabriela Miño por sus conocimientos, tiempo y pericia técnica aportados al desarrollo de mi trabajo en su fase experimental. A mis compañeros de laboratorio de la Estación Experimental Litoral Sur y la Estación Experimental Santa Catalina, quienes compartieron conmigo su amistad, conocimientos y espíritu de colaboración, gracias Ing. Ma.Eugenia Romero, Ing. Elena Corozo, Ing. Wladimir Jiménez, Ing. Diego Portalanza, Ing. Nelson Moreano, Ing. Pablo Zambrano Biol. Carmen Valladares, Ing. Lenín Arana, Alex Valarezo, José Acosta y Víctor Pincay. A mi incondicional amiga Ing. Bárbara Ordoñez S, quien siempre estuvo a mi lado brindándome apoyo y sincera amistad; gracias por todos estos años de afecto. Gracias por todo este tiempo compartido con ustedes, por los momentos gratos e imperecederos que estarán como un sello de una especial etapa de nuestras vidas. Anhelo contar con su amistad por siempre. Muchas gracias a todos Mónica LISTA DE ABREVIATURAS ADN Ácido desoxirribonucleico AFLPs Polimorfismos de la longitud de fragmentos amplificados ARN Ácido ribonucleico bp pares de bases CTAB Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide CIA Cloroformo Alcohol Isoamílico CIAT Centro Internacional de Agricultura Tropical CDB Convención sobre Diversidad Biológica dNTPs Desoxirribonucleótido trifosfato EDTA Ácido Etilen diamino Tetra Acético EtBr Bromuro de Etidio FAO Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura MBD Matriz binaria de datos MRSPs Mapas de sitios de restricción polimórficos mM milimolar MgCl2 Cloruro de Magnesio msnm metros sobre el nivel del mar ng nanogramos PCR Reacción en cadena de la polimerasa PVP Polivinil pirrolidona ppm partes por millón RAPDs DNA polimórfico amplificado aleatoriamente RFLPs Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción SSRs Secuencias simples repetidas TAE Tris Base-Ácido glacial acético-EDTA Tris-HCl Hidroximetil amino metano TM Tonelada métrica TE Tris-EDTA i