CChhee ssiiggnniiffiiccaa aanniimmaallee ttrraannssggeenniiccoo oo aanniimmaallee KKnnoocckk-- oouutt?????? ORGANISMI TRANSGENICI Gli animali che sono stati ingegnerizzati per inserzione di un gene, delezione di un gene o sostituzione di un gene si chiamano ORGANISMI TRANSGENICI e qualunque gene estraneo o modificato che è stato aggiunto si chiama transgene Un modo per studiare la funzione di un gene e’ la variazione del dosaggio genico Inserire nuove Aumento della quantita’ copie geniche di proteina + wt DNA 0 Proteina Sostituire i geni con Diminuzione della copie non funzionali quantita’ di proteina (gene knock-out) Come modificare il genoma di un mammifero in tutte le sue cellule? • Scelta del tipo cellulare da utilizzare • Metodi di inserzione del DNA nelle cellule • Sito di inserzione del DNA nelle cellule Utilizzo di zigoti appena fecondati Metodo di inserzione del DNA: microiniezione Tutte le cellule dell’organismo hanno un genoma modificato Alternativamente, si possono utilizzare le cellule staminali embrionali (Embryonic Stem cells; ES cells) Le ES cells sono la parte della blastocisti di mammifero che dara’ luogo all’embrione Le ES cells sono pluripotenti ovvero possono dare origine a tutti gli istotipi dell’organismo Le ES cells possono essere modificate (per esempio inserendo DNA nel loro genoma) pur rimanendo pluripotenti -Trasfezione -Elettroporazione La trasfezione Diversi tipi di sostanze chimiche sono in grado di legarsi al DNA e ne mediano l’ingresso nella cellula Il DNA entra nella cellula mediante sostanze chimiche che alterano la permeabilita’ della membrana L’elettroporazione Il DNA entra nella cellula mediante una scarica elettrica controllata che altera la permeabilita’ della membrana Ricapitolando: Che cellule posso usare e come le modifico? Se uso gli zigoti appena Se uso le ES cells totipotenti fertilizzati (prelevate allo stadio di blastocisti) Microinietto il DNA nel Trasferisco il DNA pronucleo maschile Per trasfezione o elettroporazione